本文關(guān)鍵詞：人參皂苷Rg1對(duì)體外培養(yǎng)人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞衰老的影響

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【摘要】：目的：建立D-半乳糖誘導(dǎo)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCB-MSCs)衰老的模型,同時(shí)探討人參皂苷Rg1(Rg1)預(yù)防hUCB-MSCs衰老的作用和可能的作用機(jī)制。方法：密度梯度離心分離臍帶血單個(gè)核細(xì)胞,獲取純化的第5代細(xì)胞,衰老組采用終濃度D-半乳糖8g/L培養(yǎng)基至第7代誘導(dǎo)衰老,同量D-半乳糖處理48h誘導(dǎo)輕微衰老后,應(yīng)用Rg10.01～3μmol/L抗衰老治療72h。衰老預(yù)防組分別應(yīng)用D-半乳糖8g/L加Rg10.01～3μmol/L作用72h。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子與細(xì)胞周期,細(xì)胞免疫化學(xué)染色鑒定胞漿內(nèi)蛋白表達(dá)情況,顯微鏡下測(cè)定細(xì)胞表面積和表達(dá)p-半乳糖苷酶細(xì)胞百分率,MTT法檢測(cè)光密度值,繪制生長(zhǎng)曲線,誘導(dǎo)培養(yǎng)后特色染色鑒定成脂與成骨細(xì)胞real time-PCR檢測(cè)衰老相關(guān)調(diào)控基因與成脂、成骨相關(guān)基因表達(dá)。結(jié)果：①對(duì)照組、模型組以及Rg10.1μmol/L組均穩(wěn)定表達(dá)CD44、CD105、CD90、CD73和胞漿的波形蛋白,不表達(dá)CD45、CD34、CD11b、CD19和HLA-DR。②與對(duì)照組相比,模型組hUCB-MSCs呈多角形,胞體變大；細(xì)胞表面積也明顯增大(P0.05)；生長(zhǎng)曲線明顯壓低,細(xì)胞倍增時(shí)間112h,而對(duì)照組為54.43h。模型組β-gal染色陽(yáng)性細(xì)胞百分率明顯高于對(duì)照組(P0.05)；hUCB-MSCs細(xì)胞周期明顯阻滯于G0/G1期,G0/G1期細(xì)胞比例較高,增殖指數(shù)明顯較低(P0.05)。③抗衰老治療中,與模型組相比,MTT測(cè)定存活細(xì)胞OD值,Rgl0.1μmol/L和3μmol/L對(duì)衰老的hUCB-MSCs增殖無(wú)明顯影響(P0.05)。④誘導(dǎo)hUCB-MSCs輕微衰老,與模型組相比,Rgl0.1μmol/L和3μmol/L治療組hUCB-MSCs MTT測(cè)定的吸光度值均明顯升高(P0.05)。⑤衰老預(yù)防處理后,與模型組相比,Rgl0.1μmol/L和3μmol/L(P0.05或P0.01)治療組hUCB-MSCs MTT測(cè)定的OD均明顯升高。模型組細(xì)胞較寬大扁平,細(xì)胞表面積比對(duì)照組和Rgl0.1μmol/L治療組均增大(P0.05),Rgl0.1μmol/L治療組次之；β-gal染色陽(yáng)性細(xì)胞百分率也呈現(xiàn)相似的排序結(jié)果；模型組hUCB-MSCs倍增時(shí)間77.83h,Rgl0.1組為65.21h；流式周期分析各組未見(jiàn)明顯差異。對(duì)照組、Rgl0.1組以及模型組hUCB-MSCs,均可誘導(dǎo)出成骨、成脂細(xì)胞。成骨誘導(dǎo)可見(jiàn),對(duì)照組hUCB-MSCs形成茜素紅染色陽(yáng)性骨結(jié)節(jié)的面積要遠(yuǎn)大于模型組,Rg10.1組次之,模型組最低；Rgl0.1組成脂誘導(dǎo)油紅染色陽(yáng)性脂滴數(shù)量似低于模型組。⑥定量PCR結(jié)果顯示,衰老預(yù)防處理后,與對(duì)照組相比,模型組P16、TBX2、ALDH1A3、CALR表達(dá)均具明顯差異(P0.01),而P53和P21mRNA表達(dá)無(wú)顯著改變；與模型組相比,Rgl0.1組P16、TBX2mRNA表達(dá)量具顯著差異(P0.01)。hUCB-MSCs誘導(dǎo)向成骨與成脂細(xì)胞分化后,與對(duì)照組比較,誘導(dǎo)組RUNX2、ALP、OCN和PPARG、LPL mRNA表達(dá)均顯著升高；與誘導(dǎo)組比較,模型組RUNX2、ALP、OCN明顯降低,而PPARG、LPL mRNA表達(dá)則明顯增高；與模型組比較,Rgl0.1組RUNX2、 LPL mRNA表達(dá)具顯著差異(P0.05),與誘導(dǎo)組比較無(wú)顯著差異(P0.05)；而ALP、OCN和PPARG mRNA表達(dá)與模型組之間比較無(wú)顯著差異。結(jié)論：采用D-半乳糖8g/L培養(yǎng)兩代,可成功誘導(dǎo)hUCB-MSCs衰老。Rgl不能治療嚴(yán)重的hUCB-MSCs衰老,但可一定程度治療hUCB-MSCs的輕微衰老,并從多方面產(chǎn)生衰老預(yù)防作用,這一作用的機(jī)制可能與P16、TBX2mRNA表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞 D-半乳糖 衰老 人參皂苷Rg1
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R285;R329
【目錄】：

• 英文縮略詞表3-5
• 目錄5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 一、材料與方法14-24
• 1. 材料14-17
• 2. 方法17-23
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23-24
• 二、結(jié)果24-42
• 1. 原代與P5內(nèi)hUCB-MSCs形態(tài)特征24
• 2. 衰老組hUCB-MSCs主要生物學(xué)特征變化24-29
• 3. Rg1對(duì)不同程度衰老hUCB-MSCs增殖的影響29-32
• 4. Rg1衰老預(yù)防后hUCB-MSCs的主要生物學(xué)特征變化32-38
• 5. mRNA相對(duì)表達(dá)量變化38-42
• 三、討論42-47
• 四、結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述52-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 致謝59-60
• 作者簡(jiǎn)介60

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：925997