本文關鍵詞：人源抗BLyS單鏈抗體的篩選及其構建與表達

  更多相關文章： B細胞 B細胞刺激因子 哺乳動物細胞展示型人源ScFv抗體庫 單鏈抗體

【摘要】：目的:從人源單鏈抗體庫中篩選抗B細胞刺激因子(BLy S)的單鏈抗體基因、構建表達載體并實現單鏈抗體的表達。方法:以哺乳動物細胞展示型人源Sc Fv抗體庫為起始文庫,通過流式細胞術進行分選,獲得熒光強度最強、比例為0.1%的陽性細胞。從候選細胞中提取質粒并轉化至DH5α中進行擴增,得到質粒轉染293T細胞作為下一輪篩選所需的抗體庫。經過依次降低抗原濃度進行了3輪分選得到2個候選的Sc Fv序列。經序列分析,選擇其中一種單鏈抗體基因,利用基因工程技術構建分泌型表達質粒,轉染293E細胞并通過鎳親和層析純化獲得B-10 Sc Fv抗體蛋白并通過Fortie Bio Octet QK進行親和力分析。結果:經過3輪篩選獲得了全新的抗BLy S Sc Fv抗體序列,成功構建并表達了anti-Bly S Sc Fv抗體蛋白,該單鏈抗體與的BLy S親和常數為3.08 nmol·L-1。結論:從哺乳動物細胞展示型人源Sc Fv抗體庫中成功獲得了可結合BLy S的全新單鏈抗體基因序列,該單鏈抗體與BLy S具有較高的親和力,這為后續(xù)的活性研究以及產品開發(fā)奠定了基礎。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;
【關鍵詞】： B細胞 B細胞刺激因子 哺乳動物細胞展示型人源ScFv抗體庫 單鏈抗體
【基金】：國家自然科學基金(81272701)
【分類號】：R392
【正文快照】： B淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLy S,也被稱為BAFF)最早于1999年由Moore等多個研究小組獨立發(fā)現的一種全新的、具有重要免疫調節(jié)功能的細胞因子[1-2]。BLy S屬于腫瘤壞死因子(tumour necrosis factor,TNF)超家族成員,是一個典型的II型跨膜單鏈糖蛋白。BLy S由28

【共引文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：924220