本文關鍵詞：Necrostatin-1對腦外傷后自噬及凋亡的影響

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【摘要】：目的：在小鼠腦外傷模型上研究程序性壞死特異性抑制劑necrostatin-1對腦外傷導致的自噬、凋亡、組織損傷和神經(jīng)功能損害的影響。 方法：采用改良的自由落體裝置，建立成熟雄性小鼠定量腦外傷(traumatic braininjury, TBI)模型。在腦外傷前通過單側側腦室注射Necrostatin-1(NEC-1)給藥，并在傷后不同時間分別于處死前1h腹腔注射碘化丙啶(propidium iodide, PI)，采用體視學顯微鏡觀察并計數(shù)各組損傷及其周邊區(qū)(皮質與海馬)PI陽性細胞數(shù)量。為了進一步確證PI陽性細胞能否代表腦外傷引起的細胞死亡和丟失，我們利用組織缺損體積(lesion volume, LV)對TBI后腦組織損傷程度進行評估；同時利用行為學試驗(Motor Test和Morris水迷宮試驗)評估TBI后各組小鼠的運動和學習記憶的情況，以探究腦外傷導致的組織學損傷能否導致神經(jīng)功能損害。為了進一步探究NEC-1是否能夠影響腦外傷后自噬和凋亡的活性，我們利用免疫印記法分別檢測了自噬活性相關蛋白(Beclin-1，LC3，，P62)和凋亡活性相關(Bcl-2，caspase-3)的表達水平。同時為了進一步確證NEC-1對腦外傷后自噬和凋亡活性的影響，我們也利用了自噬及凋亡的抑制劑(3MA，Z-VAD)聯(lián)合NEC-1檢測了caspase-3和LC3-II的表達。 結果：NEC-1減少了TBI引起的細胞丟失數(shù)量、組織缺損體積，并降低了TBI后造成的神經(jīng)功能損害程度。免疫印跡結果表明NEC-1能夠降低TBI后自噬相關蛋白Beclin-1、LC3-II的表達和凋亡相關蛋白Bcl-2、caspase-3的活性。聯(lián)合使用3MA和Z-VAD進一步證實了NEC-1的作用，并且表明在TBI后24小時3MA可以同時降低LC3-II和caspase-3的表達，而Z-VAD只降低了caspase-3表達卻增加了LC3-II的轉化。 結論：NEC-1能夠抑制TBI引起的自噬和凋亡活性上調，并且NEC-1對于自噬和凋亡的影響機制可能參與了TBI后組織病理損害和功能障礙的修復過程。
【關鍵詞】：腦外傷 自噬 凋亡 necrostatin-1 程序性壞死
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-14
• 第一部分 Necrostatin-1 對小鼠 TBI 后腦組織形態(tài)學及行為學表現(xiàn)的研究14-25
• 第一節(jié) PI 陽性細胞的時程變化14-17
• 材料和方法14-16
• 結果16-17
• 第二節(jié) 蘇木精染色測量腦缺損體積(lesion volume, LV)17-20
• 材料與方法17-19
• 結果19-20
• 第三節(jié) 行為學實驗檢測運動及學習記憶功能20-24
• 材料與方法20-22
• 結果22-24
• 小結24-25
• 第二部分 Necrostatin-1 對小鼠 TBI 后自噬及凋亡活性的影響及作用機制25-36
• 第一節(jié) Necrostatin-1 對腦外傷后自噬和凋亡相關蛋白表達的影響25-33
• 材料與方法25-29
• 結果29-33
• 第二節(jié) 聯(lián)合使用自噬及凋亡抑制劑探討不同死亡方式間的相互作用33-35
• 材料與方法33-34
• 結果34-35
• 小結35-36
• 討論36-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-47
• 展望47-48
• 綜述48-60
• 參考文獻54-60
• 縮略詞60-61
• 本課題資助項目61-62
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文62-63
• 致謝63-64

【參考文獻】

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1 陶陸陽,陳溪萍,卞士中,丁梅,官大威,王繼紅;大鼠不同程度腦挫傷后caspase-3表達的研究[J];法醫(yī)學雜志;2004年01期

本文編號：914170