本文關(guān)鍵詞：大鼠椎間盤巢源性干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)和特性鑒定

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【摘要】：目的:對大鼠椎間盤干細(xì)胞巢來源的干細(xì)胞(ISN-SCs)進(jìn)行體外分離、培養(yǎng)和特性鑒定。方法:以10周齡雄性SD大鼠作為研究對象,按照解剖區(qū)域分離椎間盤干細(xì)胞巢組織(骺板外周軟骨膜部分),用Ⅱ型膠原酶消化獲取細(xì)胞后進(jìn)行體外培養(yǎng),選用第四代細(xì)胞進(jìn)行干細(xì)胞相關(guān)特性的鑒定:采用流式細(xì)胞技術(shù)測定細(xì)胞周期;MTT法測定增殖曲線;流式細(xì)胞技術(shù)檢測干細(xì)胞相關(guān)表型;q PCR檢測干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)水平;細(xì)胞三系誘導(dǎo)分化培養(yǎng)后采用茜素紅染色及鈣鈷染色檢測成骨分化能力,阿利新藍(lán)染色檢測成軟骨分化能力,油紅O染色檢測成脂肪分化能力,q PCR檢測多向分化相關(guān)基因的表達(dá)水平。結(jié)果:大鼠ISN-SCs呈成纖維樣細(xì)胞,多觸角,具有貼壁能力,是一種慢周期細(xì)胞,高表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)陽性表面抗原分子CD29、CD90、CD44,低表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)陰性表面抗原分子CD34、CD45、CD19、CD11b;成骨誘導(dǎo)分化后茜素紅染色和鈣鈷染色均為陽性,成軟骨分化后阿利新藍(lán)染色陽性,成脂肪分化后油紅O染色陽性,且各分化相關(guān)基因(成骨:Runx2、OPN、OCN;成軟骨:SOX-9、COL2a1、ACAN;成脂肪:PPARγ、C/EBPα)表達(dá)水平較對照組顯著增高,其與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)具有相似的干細(xì)胞相關(guān)基因(NANOG、SOX-2、OCT-4)表達(dá)水平。結(jié)論:ISN-SCs具備干細(xì)胞的生物學(xué)特性,在體外經(jīng)誘導(dǎo)后可以向軟骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化,可為椎間盤的自體生物學(xué)修復(fù)研究提供良好的細(xì)胞來源。
【作者單位】： 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院脊柱外科中心;
【關(guān)鍵詞】： 椎間盤 干細(xì)胞巢 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞分化 細(xì)胞免疫表型
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81272035)
【分類號】：R329
【正文快照】： east University,Nanjing,210009,China椎間盤退變性疾病(IVDD)是指因椎間盤組織自然或在各種因素刺激下退變而引起的相關(guān)疾病,其發(fā)病率較高,可以引起諸如腰痛、坐骨神經(jīng)痛等一系列臨床癥狀。目前,臨床上針對IVDD的治療方法主要為對癥和手術(shù)治療,尚不能從根源上修復(fù)退變的椎間

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