本文關(guān)鍵詞：TNF-α增強(qiáng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫抑制作用的探討

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【摘要】：目的：探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)免疫抑制作用的影響。 方法：采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)小鼠BMSCs,觀察其細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)鑒定小鼠BMSCs表面標(biāo)志物CD29、CD34和CD44的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光法檢測小鼠BMSCs的CXCR4的表達(dá)；通過油紅O和阿爾新蘭染色分別來鑒定BMSCs成脂和成軟骨誘導(dǎo)；Elisa試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白介素-10(IL-10)和前列腺素2(PGE2)的表達(dá)；通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)檢測培養(yǎng)細(xì)胞的環(huán)氧化物水解酶2(COX-2)和NF-κB蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)果：體外培養(yǎng)的小鼠BMSCs快速貼壁并呈現(xiàn)克隆性生長,集落中心增殖的細(xì)胞大多為圓形,邊緣細(xì)胞呈梭形；流式細(xì)胞術(shù)鑒定觀察到小鼠BMSCs表面標(biāo)志物CD29陽性表達(dá)率為84.89%,CD44陽性表達(dá)率為95.77%,而CD34呈陰性表達(dá)；免疫熒光檢測到CXCR4的陽性表達(dá)率達(dá)到100%；油紅O和阿爾新蘭染色后明顯看到BMSCs分化為脂肪細(xì)胞及軟骨細(xì)胞；Elisa試劑盒檢測25ng/ml和5Ong/ml TNF-α處理組上清液中IL-10的表達(dá)水平和對(duì)照組相比沒有明顯的增加,而在100ng/ml TNF-α刺激時(shí),細(xì)胞上清液中IL-10的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增加(p=0.0020.05),而細(xì)胞上清液中PGE2的表達(dá)也有相似的結(jié)果,在100ng/ml TNF-α刺激時(shí),PGE2(p=0.020.05)的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,免疫印跡法檢測TNF-α處理組COX-2表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(p=0.020.05),NF-κB的表達(dá)也明顯增加(p=0.0250.05)。 結(jié)論：較高濃度的TNF-α可能通過NF-κB信號(hào)通路,明顯增強(qiáng)小鼠BMSCs的免疫抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 腫瘤壞死因子-α 免疫抑制 小鼠
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-8
• 第一章 材料和方法8-16
• 1.1 材料8-9
• 1.1.1 主要儀器設(shè)備8
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑8-9
• 1.2 方法9-16
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑準(zhǔn)備9-11
• 1.2.2 小鼠BMSCs的分離培養(yǎng)11
• 1.2.3 BMSCs的流式細(xì)胞術(shù)鑒定11-12
• 1.2.4 BMSCs的免疫熒光方法鑒定12
• 1.2.5 BMSCs的誘導(dǎo)分化12-13
• 1.2.5.1 BMSCs誘導(dǎo)分化成脂12
• 1.2.5.2 BMSCs誘導(dǎo)分化成軟骨12-13
• 1.2.6 Elisa檢測炎性因子13
• 1.2.7 Western blot對(duì)蛋白表達(dá)水平的鑒定13-15
• 1.2.7.1 蛋白質(zhì)提取過程13
• 1.2.7.2 Western blot檢測蛋白水平13-15
• 1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析15-16
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-21
• 2.1 BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察16
• 2.2 BMSCs的表型鑒定16
• 2.3 BMSCs免疫熒光法鑒定16-17
• 2.4 BMSCs的誘導(dǎo)分化17-18
• 2.4.1 BMSCs誘導(dǎo)分化成脂17-18
• 2.4.2 BMSCs誘導(dǎo)分化成軟骨18
• 2.5 Elisa檢測炎性因子18-19
• 2.6 Western blot檢測蛋白表達(dá)19-21
• 第三章 討論21-23
• 結(jié)論23-24
• 參考文獻(xiàn)24-27
• 綜述27-47
• 綜述參考文獻(xiàn)35-47
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果47-48
• 中英縮寫詞48-50
• 致謝50-51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 廖軍義;周年;林良波;易世雄;凡廷旭;趙辰;胡寧;梁熙;司維柯;黃偉;;聯(lián)合表達(dá)BMP2和Sox9促進(jìn)體外培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

2 陳繼德;徐芬芬;朱恒;李喜梅;唐博;劉元林;張毅;;細(xì)胞間黏附分子1通過活化MAPK通路調(diào)節(jié)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2014年01期

3 吳夢青;朱榕嘉;劉開彥;;失血性貧血小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨成脂分化的變化[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2014年01期

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本文編號(hào)：905489