本文關(guān)鍵詞：尖吻蝮蛇毒抑瘤組分Ⅰ對A549細(xì)胞及VEC細(xì)胞增殖和凋亡的影響

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【摘要】：目的：研究尖吻蝮蛇毒抑瘤組分Ⅰ（AAVC-Ⅰ）對人肺腺癌A549細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）增殖及其凋亡的影響 方法：以A549細(xì)胞株及VEC細(xì)胞為研究對象，VEC來源于新生兒臍帶采用酶消化法分離獲得并用第Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫組化法對細(xì)胞進行鑒定。實驗分為正常對照組和AAVC-Ⅰ干預(yù)組（AAVC-Ⅰ濃度梯度為：2.5、5、10、20、40μg/ml），觀察不同濃度AAVC-Ⅰ對細(xì)胞作用的結(jié)果。MTT法檢測AAVC-Ⅰ對細(xì)胞增殖的抑制率（分為12h、24h、48h）；HE染色法、AO/EB熒光染色法、Hoechst33258熒光染色法觀察AAVC-Ⅰ作用后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化情況；流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測AAVC-Ⅰ作用后細(xì)胞凋亡情況；免疫組化的方法檢測AAVC-Ⅰ作用后bax及caspase-3蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果：VEC分離提出后從形態(tài)學(xué)方面觀察，細(xì)胞呈單層貼壁生長，6-8天鋪滿瓶底80%，呈典型的鵝卵石或鋪路石狀，可傳代。第Ⅷ因子免疫組織化學(xué)染色法鑒定，胞漿可見棕黃色顆粒，證實為血管內(nèi)皮細(xì)胞，取三代以后的細(xì)胞進行實驗。 MTT結(jié)果顯示：隨著藥物濃度的增加（2.5μg/ml-40μg/ml）及時間的延長（12h、24h、48h），兩種細(xì)胞增殖抑制率亦隨之升高，呈時間-劑量依賴性。 染色結(jié)果：HE染色后兩種細(xì)胞對照組細(xì)胞輪廓清晰，邊界清楚，胞核被蘇木素染成藍(lán)色，胞漿被伊紅染成不同程度的粉色或桃紅色，24h藥物組細(xì)胞可見細(xì)胞體積縮小，核染色質(zhì)深染，胞質(zhì)致密，形成致密質(zhì)塊，可見凋亡小體。AO/EB染色后兩種細(xì)胞對照組可見均勻綠色熒光，結(jié)構(gòu)清楚，邊界清晰，24h藥物組中早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光，核固縮狀，晚期凋亡細(xì)胞可見橘紅色熒光，核固縮狀，壞死細(xì)胞呈橘紅色熒光。Hoechst33258染色后，兩種細(xì)胞對照組細(xì)胞呈均勻藍(lán)色，色澤清晰，邊界清楚，24h藥物組可見細(xì)胞染色質(zhì)固縮，細(xì)胞核成致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：藥物作用24h后，隨著藥物濃度的增加，A549細(xì)胞凋亡率從0.64%升高到70.97%；VEC細(xì)胞凋亡率從0.47%升高到78.81% 免疫組化結(jié)果顯示：與對照組相比，藥物組細(xì)胞漿可見棕黃色顆粒，隨著藥物濃度和時間的增加，，兩種細(xì)胞平均光密度值也隨之增加，呈時間-劑量依賴性。 結(jié)論：1.AAVC-Ⅰ能抑制A549細(xì)胞及VEC細(xì)胞增殖。 2.AAVC-Ⅰ能誘導(dǎo)A549細(xì)胞及VEC細(xì)胞凋亡 3.AAVC-Ⅰ對A549細(xì)胞及VEC細(xì)胞的促凋亡作用可能與細(xì)胞bax及caspase-3蛋白高表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：AAVC-Ⅰ A549 VEC 細(xì)胞凋亡 bax
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 前言13-16
• 第一部分 AAVC-I 對 A549 細(xì)胞增殖及凋亡的影響16-34
• 材料（資料、內(nèi)容）與方法16-22
• 0. 研究內(nèi)容16
• 1. 材料與方法16-21
• 1.1. 材料16-18
• 1.1.1. 主要試劑16-17
• 1.1.2. 其它試劑及配制17
• 1.1.3. 主要儀器和設(shè)備17-18
• 1.1.4. 細(xì)胞株18
• 1.2. 方法18-21
• 2. 統(tǒng)計學(xué)處理21-22
• 結(jié)果22-31
• 討論31-34
• 第二部分 AAVC-I 對 VEC 細(xì)胞增殖及凋亡的影響34-52
• 研究材料（資料、內(nèi)容）與方法34-41
• 0. 研究內(nèi)容34
• 1. 材料與方法34-40
• 1.1. 材料34-36
• 1.1.1. 主要試劑34-35
• 1.1.2. 其它試劑及配制35
• 1.1.3. 主要儀器和設(shè)備35-36
• 1.1.4. 臍帶標(biāo)本36
• 1.2. 方法36-40
• 2. 統(tǒng)計學(xué)處理40-41
• 結(jié)果41-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-57
• 綜述57-66
• 參考文獻62-66
• 附錄66-67
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果67-68
• 致謝68

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