本文關鍵詞：與雪旺細胞共培養(yǎng)誘導脂肪來源干細胞向神經元樣細胞分化的實驗研究

  更多相關文章： 神經組織工程 雪旺細胞 脂肪來源干細胞 共培養(yǎng) 誘導分化 大鼠

【摘要】：目的探討非接觸共培養(yǎng)條件下,大鼠SCs對脂肪來源干細胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的誘導分化效應,為神經組織工程尋找理想種子細胞提供參考。方法取新生1~2 d SD大鼠雙側坐骨神經,酶消化法分離培養(yǎng)SCs,并行S-100免疫熒光染色鑒定。取成年雄性SD大鼠腹股溝和腹膜后脂肪組織,差速貼壁法純化獲得ADSCs并傳代,流式細胞儀檢測第3代細胞表型CD29、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105。取原代SCs和第3代ADSCs按2∶1比例于Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)共培養(yǎng)(實驗組),以單純培養(yǎng)ADSCs作為對照組。倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變,培養(yǎng)14 d流式細胞儀檢測神經元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表達,免疫熒光染色觀察微管相關蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、神經元核蛋白(neuronal nuclei protein,Neu N)和膠質原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)神經元特異性標志物表達情況,并計算陽性細胞率。結果成功分離培養(yǎng)ADSCs并能連續(xù)傳代,流式細胞儀檢測示其高表達CD29、CD90、CD73和CD105,低表達CD34和CD45。倒置相差顯微鏡下見,實驗組共培養(yǎng)后原本呈梭形的ADSCs以胞核為中心收縮,胞體折光性增強,胞體伸出多個長而粗的突起;對照組ADSCs形態(tài)無顯著變化。流式細胞儀及免疫熒光染色示,共培養(yǎng)后14 d實驗組均表達神經元特異性標志物NSE、MAP2、Neu N、GFAP,且陽性細胞率顯著高于對照組(P0.01)。結論 SCs與ADSCs非接觸共培養(yǎng),兩者不僅能夠共生,且SCs能顯著促進ADSCs向神經元樣細胞分化。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學總醫(yī)院骨科;軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生裝備研究所;武警后勤學院附屬腦科醫(yī)院腦系;
【關鍵詞】： 神經組織工程 雪旺細胞 脂肪來源干細胞 共培養(yǎng) 誘導分化 大鼠
【基金】：國家自然科學基金青年基金資助項目(81101362;11102235)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 神經損傷修復是醫(yī)學領域難題,組織工程技術為其提供了新思路,如何大量獲取神經元成為組織工程技術治療神經系統(tǒng)疾病的關鍵[1]。Woodbury等[2]首先利用β-巰基乙醇、DMSO和丁基羥基苯甲醚作為神經誘導培養(yǎng)基誘導BMSCs分化為神經元樣細胞,但分化后的細胞不夠穩(wěn)定,約6 d后開始死

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