本文關(guān)鍵詞：天然免疫受體TLRs和NLRs家族在長(zhǎng)期培養(yǎng)hUC-MSCs中的表達(dá)譜分析

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【摘要】：目的：檢測(cè)分析體外長(zhǎng)期培養(yǎng)hUC-MSCs前后的天然免疫受體TLRs和NLRs家族表達(dá)情況，探討傳代培養(yǎng)對(duì)hUC-MSCs炎癥反應(yīng)特征和免疫調(diào)節(jié)功能以及增殖、分化、遷移能力的影響，為改進(jìn)hUC-MSCs培養(yǎng)擴(kuò)增的質(zhì)量與提高h(yuǎn)UC-MSCs在實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用中的安全性積累實(shí)驗(yàn)資料。 方法：無(wú)菌收集剖宮產(chǎn)新生兒臍帶，用膠原酶II消化結(jié)合貼壁選擇分離純化hUC-MSCs，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合誘導(dǎo)分化鑒定長(zhǎng)期培養(yǎng)前后的hUC-MSCs（3、28代）；按Bustin S A等推薦標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)、驗(yàn)證33個(gè)TLRs和NLRs家族的PCR引物； RT-qPCR檢測(cè)長(zhǎng)期培養(yǎng)前后（3、28代）hUC-MSCs的TLRs和NLRs家族成員的基因表達(dá)情況。 結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)合誘導(dǎo)分化顯示長(zhǎng)期培養(yǎng)前后（3、28代）hUC-MSCs細(xì)胞表型均為CD29+/CD44+/CD105+/CD31-/CD34-/CD40-/CD45-/CD106-/HLA-DR，均能被誘導(dǎo)成為成骨和脂肪細(xì)胞，符合MSCs基本特征；設(shè)計(jì)的33對(duì)TLRs和NLRs家族成員基因引物經(jīng)PCR產(chǎn)物測(cè)序后，擴(kuò)增產(chǎn)物與目的基因靶部位的堿基序列基本一致，引物具有特異性；TLRs家族成員在hUC-MSCs中均有表達(dá)，且TLR1、TLR3和TLR6高表達(dá)，TLR2、TLR4、TLR5和TLR10中表達(dá)，TLR7、TLR8和TLR9低表達(dá)，第3代與28代比較，TLRs中除TLR2、TLR3mRNA表達(dá)量上升、TLR7mRNA表達(dá)量基本不變外，其余成員mRNA表達(dá)量均有所下降，其中TLR3mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；NLRs家族成員在hUC-MSCs中也均有表達(dá)，且NOD1、NLRC4、NLRC5、NLRP1、NLRP3、NLRP10、NAIP、NLRX1和APAF1高表達(dá)，其余成員低表達(dá)； NLRs中除NLRP10mRNA表達(dá)量上升、NLRC5、NLRX1mRNA表達(dá)量基本不變外，其余成員mRNA表達(dá)量均有所下降，其中NLRP1mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)證實(shí)，，在常規(guī)條件下培養(yǎng)hUC-MSCs至28代，細(xì)胞仍具有MSCs的基本生物學(xué)表型，但細(xì)胞的增殖分化能力有所下降；hUC-MSCs表達(dá)所有33個(gè)TLRs和NLRs家族成員的基因，不同成員之間的基因表達(dá)量存在較大差異；在培養(yǎng)傳代過(guò)程中，hUC-MSCs大多數(shù)TLRs和NLRs家族成員的基因表達(dá)呈下降趨勢(shì)，部分基因表達(dá)水平增加、減少或無(wú)變化，提示體外傳代培養(yǎng)對(duì)hUC-MSCs表達(dá)TLRs和NLRs家族成員的影響是多向性的。因TLRs和NLRs家族不同成員及其信號(hào)通路與細(xì)胞的增殖分化、炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)功能等作用機(jī)制密切相關(guān)，可能反應(yīng)出長(zhǎng)期培養(yǎng)對(duì)hUC-MSCs相關(guān)功能的影響，為hUC-MSCs的功能干預(yù)提供研究的靶標(biāo)，為改善培養(yǎng)細(xì)胞質(zhì)量，強(qiáng)化細(xì)胞功能指示方向。這些都必將有利于hUC-MSCs在組織工程和臨床移植治療中的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 長(zhǎng)期培養(yǎng) 天然免疫受體 Toll樣受體 NOD樣受體 表達(dá)譜
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 前言9-15
• 第一章 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與生物活性鑒定15-24
• 引言15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-22
• 1.4 討論22-23
• 1.5 結(jié)論23-24
• 第二章 TLRs 和 NLRs 家族成員基因分析 PCR 引物的設(shè)計(jì)與質(zhì)量鑒定24-48
• 引言24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-47
• 2.4 討論47
• 2.5 結(jié)論47-48
• 第三章 天然免疫受體 TLRs 和 NLRs 家族在長(zhǎng)期培養(yǎng) hUC-MSCs 中的表達(dá)譜分析48-63
• 引言48
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料48-49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法49-53
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-60
• 3.4 討論60-62
• 3.5 結(jié)論62-63
• 全文總結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-71
• 英文縮略詞表71-72
• 在校期間發(fā)表論文72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 朱雅姝;趙春華;;間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)能力——臨床治療的希望[J];中國(guó)科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2009年08期

2 許超;廖繼東;柳菁;毛文哲;李揚(yáng)秋;;長(zhǎng)期培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物活性及其限制性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年10期

3 毛文哲;許超;李揚(yáng)秋;陳少華;柳菁;劉俊;廖繼東;;長(zhǎng)期培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3的表達(dá)[J];中國(guó)病理生理雜志;2012年06期

4 何小兵;房永祥;賈懷杰;陳國(guó)華;曾爽;景志忠;程國(guó)鋒;;Toll樣受體7介導(dǎo)的抗病毒天然免疫反應(yīng)研究進(jìn)展[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2010年06期

本文編號(hào)：884803