本文關(guān)鍵詞：一株人源性輪狀病毒的分離及其在Vero細(xì)胞上的適應(yīng)性培養(yǎng)

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【摘要】：A群輪狀病毒(Rotavirus, RV)是引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體,全球每年因RV感染腹瀉嚴(yán)重脫水造成近六十萬嬰幼兒死亡。我國5歲以下嬰幼兒輪狀病毒腹瀉發(fā)病人數(shù)每年超過1000萬,每年導(dǎo)致大約有3～4萬名嬰幼兒死亡。用疫苗預(yù)防RV感染是最經(jīng)濟(jì)、最有效的方法。目前已有單價或多價的減毒活疫苗用于RV感染的預(yù)防接種。對疫苗免疫效果觀察發(fā)現(xiàn)不同毒株,不同血清型制備的疫苗在不同地區(qū),不同條件下存在免疫效率的差異。研究表明,這種差異主要源于毒株的性質(zhì)、地理環(huán)境條件、以及血清型的交叉保護(hù)作用。因此,研制有效的疫苗應(yīng)考慮以上因素,其中選擇理想毒株及細(xì)胞基質(zhì)研制有效疫苗至關(guān)重要�；诖�,我們期望從流行地區(qū)篩選具有病原學(xué)、流行病學(xué)意義的毒株作為疫苗的候選株。 方法：本研究采用膠體金、PAGE、PCR對收集的樣品進(jìn)行輪狀病毒定性檢測。陽性樣品經(jīng)處理后進(jìn)行組織培養(yǎng)分離,第一步,在易感細(xì)胞MA104上適應(yīng)培養(yǎng),適應(yīng)后的RV毒株轉(zhuǎn)到人用疫苗研制的Vero細(xì)胞基質(zhì)上適應(yīng)培養(yǎng)。在適應(yīng)性培養(yǎng)過程中,確定了病毒接種的最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI),不同代次基因組圖譜、基因序列,研究了病毒的復(fù)制動力學(xué),最后進(jìn)行了中和鑒別試驗(yàn)。結(jié)果顯示：分離到的病毒為A組輪狀病毒,基因組為4：2：3：2排列,基因分型為G1P [8]型。毒株經(jīng)適應(yīng)性培養(yǎng)后可使、Zero細(xì)胞產(chǎn)生典型的細(xì)胞病變(CPE),病毒復(fù)制能力隨代次增加呈增強(qiáng)趨勢。毒株在Vero細(xì)胞上增殖到第10代,復(fù)制穩(wěn)定,感染性滴度達(dá)到7.25log CCIDso/ml,增殖高峰為96h。中和鑒別試驗(yàn)證實(shí)病毒培養(yǎng)液為所分離到的特異性病毒,無其他病毒污染。病毒傳代過程的基因組檢測表明,毒株遺傳穩(wěn)定,未發(fā)現(xiàn)基因組遷移及節(jié)段的變化。 結(jié)論：從腹瀉樣品中分離得到的人源輪狀病毒毒株(命名為ZTR-68株),為G1P[8]型,具有良好的組織培養(yǎng)適應(yīng)性及遺傳穩(wěn)定性。該項(xiàng)研究為進(jìn)一步研究其生物學(xué)性質(zhì)和疫苗制備提供了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：輪狀病毒 分離 適應(yīng)性培養(yǎng) Vero細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-13
• 第一部分 人源輪狀病毒野毒株G1血清型的篩選分離13-29
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法13-20
• 二、結(jié)果與分析20-25
• 三、討論25-28
• 四、小結(jié)28-29
• 第二部分 輪狀病毒ZTR-68株在Vero細(xì)胞上的適應(yīng)性培養(yǎng)29-45
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法29-36
• 二、結(jié)果與分析36-42
• 三、討論42-44
• 四、小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 附錄50-54
• 致謝54-56
• 研究生簡歷56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56-57

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：878215