本文關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素αvβ3超表達(dá)及其對(duì)胚胎黏附的影響

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【摘要】：一、目的和意義 胚胎著床(Embryo implantation)是處于活化狀態(tài)的胚胎定位、黏附、入侵并最終植入容受態(tài)子宮內(nèi)膜的復(fù)雜過程。胚胎的侵入能力和子宮內(nèi)膜容受性(Endometrial receptivity, ER)的建立是胚胎成功著床的關(guān)鍵。隨著輔助生殖技術(shù)(Assisted reproductive technology, ART)的發(fā)展,個(gè)體化的控制性超促排卵方案、受精及實(shí)驗(yàn)室胚胎培養(yǎng)技術(shù)的進(jìn)步使胚胎質(zhì)量得到了顯著提高,但低種植率始終是生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域尚未解決的難題之一。子宮內(nèi)膜容受性受損可能是導(dǎo)致胚胎低種植率的主要原因,而無法診斷和治療子宮內(nèi)膜容受性受損是ART成功的主要障礙。因此,評(píng)估和改善子宮內(nèi)膜容受性對(duì)提高ART成功率具有極其重要的臨床意義,探究子宮內(nèi)膜容受性標(biāo)志物及其作用機(jī)制是改善內(nèi)膜容受性和提高妊娠率的基礎(chǔ)。整合素a v β3(Integrin alphavbeta3, ITGAVB3)特異性表達(dá)于子宮內(nèi)膜種植窗期(Window of implantation, WOI),其表達(dá)異常使子宮內(nèi)膜容受性受損,與不孕癥的發(fā)生密切相關(guān),是目前公認(rèn)的子宮內(nèi)膜容受性重要生物學(xué)標(biāo)志之一,但其在胚胎著床過程中的具體作用機(jī)制目前仍不明確。本研究通過構(gòu)建整合素α ν β3真核表達(dá)載體,使子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的整合素α ν β3水平超表達(dá),觀察其對(duì)胚胎細(xì)胞球狀體黏附的影響,初步探討整合素α v β3在胚胎黏附過程中的作用機(jī)制,為進(jìn)一步闡明其在胚胎著床及生殖過程中的功能及分子機(jī)制提供研究基礎(chǔ)。 二、方法 1.構(gòu)建pcDNA3.1-3FLAG-ITGAV、pcDNA3.1-3FLAG-ITGB3真核表達(dá)載體,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞(RL95-2細(xì)胞)。 2.經(jīng)Real time RT-PCR檢測(cè)整合素α v (ITGAV)、整合素β3(ITGB3)及骨橋蛋白(OPN)的mRNA表達(dá)。 3.經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)、間接免疫熒光檢測(cè)IITGAV、ITGB3的蛋白表達(dá)。 4.建立Bewo細(xì)胞球狀體與RL95-2細(xì)胞單層的體外胚胎著床模型,通過黏附實(shí)驗(yàn)觀察和分析整合素αvβ3超表達(dá)對(duì)胚胎與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的黏附情況的影響,經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè)共培養(yǎng)體系ITGAV、ITGB3及OPN的表達(dá)。 三、結(jié)果 1.與單獨(dú)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-3FLAG-ITGAV、pcDNA3.1-3FLAG-ITGB3相比,ITGAV、ITGB3真核表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染使RL95-2細(xì)胞的整合素αv、整合素β3表達(dá)水平均明顯升高。 2.RL95-2細(xì)胞整合素αvβ3超表達(dá)顯著提高Bewo球狀體與RL95-2細(xì)胞單層的黏附率(74.44±4.51%vs53.31±3.14%,P0.01),促進(jìn)Bewo球狀體在RL95-2細(xì)胞單層的擴(kuò)展(118.26±6.00μm vs111.88Π3.72μm, P0.05)。 3.在共培養(yǎng)體系中,子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素avβ3超表達(dá)促進(jìn)Bewo球狀體整合素α v和骨橋蛋白的表達(dá)。 四、結(jié)論 1.成功構(gòu)建了1TGAV、ITGB3真核表達(dá)載體。 2. ITGAV、ITGB3共轉(zhuǎn)染使RL95-2細(xì)胞的整合素ανβ3水平超表達(dá)。 3.子宮內(nèi)膜細(xì)胞整合素ανβ3超表達(dá)促進(jìn)胚胎在子宮內(nèi)膜的黏附和擴(kuò)展。 4.整合素αvβ3和骨橋蛋白介導(dǎo)胚胎在子宮內(nèi)膜細(xì)胞上的黏附與侵入,在胚胎著床中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：整合素αvβ3 RL95-2細(xì)胞 超表達(dá) 子宮內(nèi)膜容受性 胚胎著床
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R321.3
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-7
• 目錄7-8
• 符號(hào)表8-10
• 前言10-12
• 第一部分 ITGAV、ITGB3真核表達(dá)載體的構(gòu)建12-17
• 材料與方法12-14
• 結(jié)果14-17
• 第二部分 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素αvβ3超表達(dá)及其對(duì)胚胎黏附的影響17-34
• 第一節(jié) 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素αvβ3超表達(dá)及鑒定17-29
• 材料與方法17-23
• 結(jié)果23-29
• 第二節(jié) 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素αvβ3超表達(dá)對(duì)胚胎黏附的影響29-34
• 材料與方法29-31
• 結(jié)果31-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述 整合素αvβ3和骨橋蛋白在人子宮內(nèi)膜容受性的建立和胚胎著床中作用機(jī)制研究進(jìn)展40-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 附錄47-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成的論文51-52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李婷婷;方叢;賈磊;岳超敏;;小鼠早期完整胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜白血病抑制因子和整合素β_3表達(dá)并提高子宮容受性[J];中國(guó)病理生理雜志;2012年02期

2 牟丹蕾,白雪帆,黃長(zhǎng)形,潘蕾,李光玉,王英鵬,楊為松;人整合素αvβ3在CHO細(xì)胞表達(dá)的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年08期

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本文編號(hào)：869937