發(fā)布時間：2017-09-17 12:01

  本文關(guān)鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌重組NspA蛋白疫苗的免疫活性及其對小鼠的免疫保護作用

  更多相關(guān)文章： B群腦膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A 重組蛋白 免疫活性 免疫保護

【摘要】：目的：探討B(tài)群腦膜炎奈瑟菌NspA原核重組蛋白誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的特異性體液免疫和細胞免疫應(yīng)答水平，初步評價rNspA對實驗小鼠的免疫保護作用，為研制B群腦膜炎奈瑟菌蛋白疫苗提供相關(guān)實驗依據(jù)。 方法：以B群腦膜炎奈瑟菌標準株MC58基因組DNA為模板，構(gòu)建原核重組表達載體pGEX-6P-1/NspA，大量表達重組蛋白，經(jīng)GST親和層析純化柱pH梯度洗脫，收集重組蛋白，采用Western-blot法鑒定。腹腔途徑免疫雌性BALB/c小鼠，采用間接ELISA法檢測免疫小鼠生殖道黏膜分泌液中抗NspA的sIgA抗體水平和血清中抗NspA的IgG及其亞類抗體水平，ELISA雙抗體夾心法檢測脾淋巴細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ水平，CCK8法檢測脾淋巴細胞增殖反應(yīng)。按比例混合MC58菌液、免疫血清及乳兔補體，測定血清抗體體外殺菌滴度。構(gòu)建小鼠感染動物模型，觀察和計算rNspA對實驗小鼠的免疫保護率。 結(jié)果：構(gòu)建的原核表達載體pGEX6p-1/NspA，經(jīng)雙酶切和測序鑒定正確。通過優(yōu)化誘導(dǎo)表達條件，rNspA能在培養(yǎng)上清中以可溶性狀態(tài)表達，表達產(chǎn)物采用GST樹脂純化后經(jīng)Western-blot鑒定，證實該目的蛋白的存在。腹腔途徑免疫雌性BALB/c小鼠，rNspA組小鼠生殖道黏膜產(chǎn)生的特異性sIgA和血清特異性IgG及IgG亞類抗體水平均呈上升趨勢，rNspA組小鼠生殖道灌洗液中特異性sIgA及小鼠血清中總IgG、IgG1、IgG2a、IgG3在第6周時均達到最大值，抗體效價分別為1:2800、1:8800、1:7000、1:5120和1:2800；rNspA免疫組血清IgG2a/IgG1的比值，在免疫的2w、4w、6w、8w時分別為0.795、0.637、0.710和0.624，，比值均小于1。INF-γ、IL-4的含量在第6周達到高峰，分別為300.0pg/mL、229.0pg/mL；rNspA組脾淋巴細胞刺激指數(shù)（SI）為1.61，明顯高于GST和PBS對照組（P0.05）。rNspA組小鼠免疫血清稀釋度為1：64時，其體外殺菌率達50%以上；rNspA免疫組小鼠感染MC58后72h內(nèi)，小鼠的存活率高達100%，而對照組（GST組、PBS組）小鼠感染MC58后72h后的存活率為0。 結(jié)論： 1.成功構(gòu)建了B群腦膜炎奈瑟菌表面蛋白A原核表達重組載體pGEX6p-1/NspA。 2. rNspA能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高水平的體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答水平，且以Th2傾向性體液免疫應(yīng)答為主；可在黏膜局部誘生較高水平的特異性sIgA抗體。 3. rNspA對感染B群腦膜炎奈瑟菌的實驗小鼠具有較強的免疫保護作用，免疫血清體外在補體介導(dǎo)下具有一定殺菌活性。
【關(guān)鍵詞】：B群腦膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A 重組蛋白 免疫活性 免疫保護
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378.15
【目錄】：

• 英文縮略語索引4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 實驗材料11-13
• 實驗方法13-26
• 實驗結(jié)果26-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-47
• 附錄47-49
• 文獻綜述49-58
• 參考文獻55-58
• 發(fā)表及及待發(fā)表論文58-59
• 致謝59

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本文編號：869264