本文關(guān)鍵詞：同型半胱氨酸通過干擾膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化

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【摘要】：目的闡明不同濃度同型半胱氨酸對THP-1源性巨噬細(xì)胞泡沫化的影響;探討LXRα在同型半胱氨酸引起脂代謝紊亂中的作用。方法以THP-1單核細(xì)胞作為研究對象,培養(yǎng)THP-1單核細(xì)胞,取對數(shù)增殖期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗,先后與佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培養(yǎng),成功復(fù)制試驗用泡沫細(xì)胞模型,然后分別加入0、50、100、200μmol/L的Hcy,各組細(xì)胞培養(yǎng)24小時,其中0組為對照組(不加入Hcy)。利用油紅O染色(Oil Red O,ORO)檢測泡沫細(xì)胞內(nèi)中性脂滴蓄積情況。利用酶終點(diǎn)法定量測定細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(Total Cholesterol,TC)、游離膽固醇(Free Cholesterol,FC)、膽固醇酯(Cholesterol Ester,CE)的含量,觀察不同濃度Hcy對泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量的影響。利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測泡沫細(xì)胞LXRα蛋白表達(dá),利用實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real Time-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)測定LXRαm RNA表達(dá),觀察不同濃度hcy對泡沫細(xì)胞LXRα表達(dá)的影響。結(jié)果與對照組相比較,隨著Hcy濃度的增加,ORO染色結(jié)果顯示,Hcy呈劑量依賴性地促進(jìn)了巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇的聚集。實驗組(hcy50、100、200μmol/L)泡沫細(xì)胞計數(shù)陽性百分率均較對照組升高(P0.05),其中以Hcy 100μmol/L組升高明顯。在不同濃度Hcy干預(yù)下,泡沫細(xì)胞內(nèi)TC、FC及CE含量均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,實驗組LXRα蛋白表達(dá)均低于對照組(P0.05),其中以Hcy 100μmol/L組降低最為明顯。RT-PCR結(jié)果顯示,與對照組相比較,實驗組LXRαm RNA表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論同型半胱氨酸能夠引起THP-1源性巨噬細(xì)胞泡沫化程度增加,使LXRαm RNA低表達(dá)導(dǎo)致膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)障礙是其引起脂代謝紊亂的可能機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：同型半胱氨酸 巨噬細(xì)胞 泡沫細(xì)胞 膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn) 肝核受體α
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 中英文縮略詞表7-11
• 前言11-15
• 材料與方法15-27
• 1.材料15-19
• 1.1 細(xì)胞株15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 主要儀器16-17
• 1.4 試劑的配制17-19
• 2.方法19-27
• 2.1 THP-1 單核細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)、換液、傳代及凍存19-20
• 2.2 細(xì)胞模型的制備20
• 2.3 實驗分組20-21
• 2.4 油紅O染色對細(xì)胞進(jìn)行定性分析21
• 2.5 酶終點(diǎn)法對總膽固醇（TC）和游離膽固醇（FC）測定進(jìn)行定量分析21-22
• 2.6 細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測LXRα 表達(dá)22-23
• 2.7 熒光定量PCR測定LXRα 基因mRNA表達(dá)23-26
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)方法26-27
• 結(jié)果27-30
• 1.THP-1 單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞27
• 2.泡沫細(xì)胞的定性及定量分析27-28
• 2.1 圖3為不同Hcy濃度組細(xì)胞油紅染色，從圖中可以發(fā)現(xiàn)各組細(xì)胞中脂肪滴被染成橘紅色，，核呈藍(lán)色27
• 2.2 不同Hcy濃度組之間TC, FC, CE和CEE之間的比較27-28
• 3. 不同濃度 Hcy 對巨噬細(xì)胞中 LXRα 蛋白表達(dá)的影響28
• 4. 不同濃度Hcy干預(yù)后，各組細(xì)胞中LXRαmRNA表達(dá)情況28-30
• 結(jié)論30-31
• 附圖31-34
• 圖 1 THP-1 單核細(xì)胞×20031
• 圖 2 THP-1 單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞×40031
• 圖3 不同濃度Hcy干預(yù)組細(xì)胞油紅O染色，油鏡31-32
• 圖4 不同濃度Hcy干預(yù)組細(xì)胞油紅細(xì)胞染色陽性率比較32
• 圖5 不同濃度Hcy干預(yù)組細(xì)胞中LXRα 蛋白表達(dá)免疫組化×20032-33
• 圖6 不同濃度Hcy干預(yù)對細(xì)胞中LXRαmRNA表達(dá)的影響33-34
• 討論34-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-48
• 一、LXR與PPAR交互作用41-42
• 二、LXR與飲食膽固醇吸收42
• 三、LXR與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)（Reverse Cholesterol Transport, RCT）42-43
• 四、LXR與膽汁酸43-44
• 五、LXR與脂肪酸44
• 六、結(jié)語44-45
• 綜述參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉守鉀;楊智承;劉苑;譚毓治;;動脈粥樣硬化中單核細(xì)胞招募與泡沫細(xì)胞形成[J];中國動脈硬化雜志;2009年11期

2 叢廣志;賈紹斌;陳大鵬;羅彩琴;;高同型半胱氨酸血癥對主動脈組織Bcl-2基因甲基化影響[J];臨床心血管病雜志;2012年04期

3 姜怡鄧;馬琳娜;孫煒煒;王菊;梁宇;;LDLR DNA甲基化在Hcy致泡沫細(xì)胞形成中作用機(jī)制的研究[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2011年08期

本文編號：865690