本文關(guān)鍵詞：慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重組表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重組表達(dá)系統(tǒng)。方法根據(jù)RNA干擾序列設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)4個(gè)可能的caspase-3 siRNA序列。應(yīng)用全基因合成技術(shù)和亞克隆技術(shù)構(gòu)建GV115-caspase-3 siRNA并采用PCR和測序?qū)ζ滂b定。病毒包裝后轉(zhuǎn)染人胚腎293T細(xì)胞,通過應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后caspase-3基因敲減效率,篩選高效的GV115-caspase-3 siRNA。結(jié)果 GV115-caspase-3 siRNA質(zhì)粒PCR鑒定顯示位于341bp附近的條帶,測序結(jié)果與設(shè)計(jì)的基因序列完全吻合,4個(gè)可能的caspase-3 siRNA序列中基因敲減效率最高的可達(dá)到84.2%。結(jié)論成功構(gòu)建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重組表達(dá)系統(tǒng)。
【作者單位】： 青島大學(xué)附屬醫(yī)院脊柱外科;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒 caspase- RNA干擾 基因治療
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171758)
【分類號】：R373
【正文快照】： 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在生理或病理?xiàng)l件下,受到刺激信號的作用以及后續(xù)基因調(diào)控的一種自主的程序性死亡過程。在哺乳動物中,細(xì)胞凋亡通路主要有以下幾種通路:死亡受體介導(dǎo)、線粒體介導(dǎo)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[1]。盡管以上細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中細(xì)胞凋亡信號以及隨后的

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本文編號：862886