本文關(guān)鍵詞：小鼠CLP膿毒癥模型的建立及抗菌肽Lycosin-1對(duì)其肝腎功能的影響

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【摘要】：目的 膿毒癥(sepsis)是由細(xì)菌、真菌、病毒等各種感染因素導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征,病情加重可發(fā)展為多器官功能衰竭及膿毒癥休克。炎癥反應(yīng)過(guò)度激活及免疫調(diào)節(jié)紊亂在膿毒癥發(fā)生發(fā)展中起重要作用。盲腸結(jié)扎穿孔(Cecal ligation and puncture, CLP)法可引起腹腔混合細(xì)菌感染,誘發(fā)急性腹膜炎導(dǎo)致膿毒癥。利用CLP法制作的膿毒癥模型被廣泛用于膿毒癥病理生理機(jī)制及藥物治療等研究。抗菌肽Lycosin-1(Lyc)是從狼蛛singorensis中提取的陽(yáng)離子抗菌肽,具有廣譜抗菌作用。近年來(lái),許多研究發(fā)現(xiàn)抗菌肽對(duì)CLP膿毒癥模型有抗菌作用,但抗菌肽在抗菌的同時(shí)是否對(duì)機(jī)體的肝腎功能產(chǎn)生不良影響,目前相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究探討抗菌肽Lycosin-1對(duì)正常Balb/c小鼠及膿毒癥模型小鼠的肝腎功能影響。 方法 本研究分三部分：首先采用盲腸結(jié)扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)法制作小鼠膿毒癥模型,改變盲腸結(jié)扎長(zhǎng)度、穿刺針大小及穿孔次數(shù),以獲得中重度膿毒癥動(dòng)物模型,即72h小鼠死亡率達(dá)70-100%。第二部分為腹腔注射不同濃度Lyc對(duì)正常小鼠肝腎急性毒性(6h、12h、24h)的研究,分為5個(gè)濃度亞組,即25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、500ug/ml組,各組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只。觀察24h內(nèi)各組小鼠死亡情況及一般活動(dòng)狀況,并在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取血,檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)等生化指標(biāo)的變化。第三部分為探討腹腔注射Lyc(200ug/ml)對(duì)CLP膿毒癥模型小鼠的肝臟和腎臟是否有保護(hù)作用,分為L(zhǎng)yc干預(yù)6h組、12h組、24h組,各組再分為4個(gè)小組：①Sham組(假手術(shù)組)：打開小鼠腹腔找到盲腸,不結(jié)扎及穿孔,關(guān)閉腹腔后腹腔注射0.5ml生理鹽水；②Sham+Lyc:不結(jié)扎及穿孔盲腸,關(guān)閉腹腔時(shí)注射Lyc (200ug/ml)0.5ml:③CLP組：見實(shí)驗(yàn)一中C組CLP模型制備方法,即在距盲腸末端1cm處結(jié)扎,并用12號(hào)針頭貫穿盲腸穿孔2次。腹腔注射0.5m1生理鹽水液體復(fù)蘇；④CLP+Lyc見實(shí)驗(yàn)一中的C組CLP模型制備方法,術(shù)后立即腹腔注射Lyc(200ug/ml)0.5ml,每小組各10只小鼠。同樣檢測(cè)各組小鼠血清肝腎代謝指標(biāo)的變化。 結(jié)果 1.采用距盲腸末端1cm處結(jié)扎,12號(hào)針頭貫穿盲腸穿孔2次的方法制備的CLP模型小鼠72h死亡率達(dá)70-100%,且具有典型膿毒癥表現(xiàn),死亡小鼠解剖證實(shí)腹腔存在惡臭積液、部分腸管粘連。 2.不同濃度Lycosin-1腹腔注射24h內(nèi)均無(wú)小鼠死亡,與對(duì)照組比較,雖然給藥組的一些指標(biāo)稍偏高或偏低,但差異無(wú)顯著性(P0.05),且無(wú)劑量依賴性； 3.與假手術(shù)組比較,CLP膿毒癥小鼠血清ALT、AST、BUN、SCr4個(gè)指標(biāo)在術(shù)后6h、12h、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均升高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；Lyc干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)血清ALT、AST、BUN、SCr濃度與CLP組比較并沒有降低,反而升高更顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.采用盲腸結(jié)扎穿孔法成功制作了中重度膿毒癥模型。 2.腹腔注射Lyc對(duì)正常小鼠的肝腎功能無(wú)急性毒副作用,但對(duì)膿毒癥所致的小鼠肝腎損傷無(wú)保護(hù)作用,甚至可能存在毒副作用。
【關(guān)鍵詞】：盲腸結(jié)扎穿孔法 膿毒癥 抗菌肽 Lycosin-1 肝腎功能
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R459.7;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 目錄10-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 小鼠CLP膿毒癥模型的建立及抗菌肽LYCOSIN-1對(duì)其肝腎功能的影響14-24
• 第一部分 建立小鼠CLP膿毒癥模型14-16
• 1 材料14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果15-16
• 第二部分 抗菌肽Lycosin-1對(duì)正常Balb/c小鼠的肝腎功能影響16-19
• 1 材料16-17
• 2 實(shí)驗(yàn)步驟17
• 3 結(jié)果17-19
• 第三部分 抗菌肽Lycosin-1對(duì)CLP膿毒癥模型小鼠的肝腎功能影響19-24
• 1 材料19
• 2 實(shí)驗(yàn)步驟19-20
• 3 結(jié)果20-24
• 第三章 討論24-28
• 1 CLP膿毒癥模型的建立24
• 2 抗菌肽Lycosin-1對(duì)CLP模型小鼠肝腎功能影響24-28
• 第四章 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述32-48
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 致謝48

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：848065