發(fā)布時(shí)間：2017-09-13 14:04

  本文關(guān)鍵詞：Sox2誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞直接重編程為神經(jīng)干細(xì)胞

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【摘要】：目的:探討Sox2誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)直接重編程為神經(jīng)干細(xì)胞的方法,為誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞(induced neural stem cells,i NSCs)作為種子細(xì)胞治療脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:逆轉(zhuǎn)錄病毒感染Sox2轉(zhuǎn)錄因子的MEFs在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)10 d。隨后,懸浮、貼壁反復(fù)循環(huán)培養(yǎng)3次。Real-time PCR檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志基因和多潛能標(biāo)志基因的表達(dá)。i NSCs在分化培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)7~14 d,免疫熒光分別檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物nestin、MAP2、GFAP和MBP的表達(dá)。將i NSCs顯微注射至小鼠大腦皮質(zhì),7~14 d后免疫熒光檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物nestin、MAP2、GFAP和MBP的表達(dá)。結(jié)果:Real-time PCR顯示i NSCs的多種神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志基因nestin、Blbp、Pax6和zbtb16表達(dá)較誘導(dǎo)前顯著增高(P0.05),且i NSCs不表達(dá)多潛能相關(guān)基因Nanog、Oct4和zfp42。免疫熒光顯示i NSCs高表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物nestin。免疫熒光同時(shí)表明i NSCs可在體內(nèi)外存活并分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。結(jié)論:Sox2可以誘導(dǎo)MEFs直接重編程為神經(jīng)干細(xì)胞。i NSCs具有自我更新的能力,且在體內(nèi)外都具有三向分化潛能,可作為修復(fù)SCI合適的種子細(xì)胞。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院脊柱外科;
【關(guān)鍵詞】： Sox 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 直接重編程 神經(jīng)干細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.31170947;No.31470949;No.81472122) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.S2012020011099;No.S2013010016413) 廣東省科技計(jì)劃(No.2012B060300008) 教育部博士點(diǎn)新教師基金資助項(xiàng)目(No.20100171120088) 廣州市科技計(jì)劃(No.2013J4100062)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 2006年,Takahashi等[1]首次實(shí)現(xiàn)將小鼠和人的體細(xì)胞直接重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluri-potent stem cells,i PSCs)。隨后數(shù)年,學(xué)者們進(jìn)一步改進(jìn)了誘導(dǎo)方法并提高了誘導(dǎo)效率。包括肌萎縮側(cè)索硬化癥[2]、脊髓性肌萎縮[3]和帕金森氏病[4]等多種疾病特異性的i PSCs細(xì)胞系

【相似文獻(xiàn)】

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