本文關鍵詞：LL-37基因轉(zhuǎn)染對巨噬細胞活化及信號轉(zhuǎn)導分子表達的影響

  更多相關文章： LL-37 基因轉(zhuǎn)染 RAW264.7細胞 TLR4 NF-κB

【摘要】：人源陽離子抗菌肽hCAP-18/LL-37作為天然免疫的效應分子，不僅具有廣譜的抗感染作用，還具有趨化、中和內(nèi)毒素、促血管生成素等多種生物學效應。近年來研究證實抗菌肽LL-37具有強大的固有免疫調(diào)節(jié)功能，并可以通過調(diào)節(jié)巨噬細胞和樹突狀細胞的活化參與獲得性免疫應答。巨噬細胞是人體免疫系統(tǒng)的重要細胞，在機體天然免疫與適應性免疫中都發(fā)揮著重要作用。文獻報道LL-37可在上皮細胞、肺泡巨噬細胞呈誘導性表達。然而LL-37在巨噬細胞的表達與活化及其機制研究尚不十分清楚。 本研究通過建立穩(wěn)定表達LL-37的小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞模型，研究LL-37基因?qū)奘杉毎罨δ艿挠绊懠盎罨南嚓P分子機制。為LL-37的臨床應用奠定實驗基礎。 1建立穩(wěn)定表達LL-37基因的小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞模型 擴增真核表達質(zhì)粒pEGFP-C1-LL-37，，經(jīng)轉(zhuǎn)染、篩選和鑒定，得到穩(wěn)定表達pEGFP-C1-LL-37質(zhì)粒的RAW264.7細胞（C1LR）以及穩(wěn)定表達pEGFP-C1質(zhì)粒的RAW264.7細胞(C1R)，為進一步實驗奠定基礎。 2LL-37基因轉(zhuǎn)染對RAW264.7細胞活化功能的影響 采用MTT法檢測細胞增殖活性；熒光微球吞噬實驗測定吞噬功能；NO檢測試劑盒檢測NO分泌水平。結果表明：C1LR細胞組與細胞對照組及C1R細胞組比較細胞增殖能力明顯增強；吞噬功能增強；NO分泌水平明顯增多。 3LPS可以促進LL-37基因?qū)π∈缶奘杉毎鸕AW264.7的活化。 采用LPS刺激RAW264.7、C1LR、C1R細胞，采用上述方法進行活性測定，結果顯示，經(jīng)LPS刺激后，C1LR細胞較C1R細胞及未經(jīng)LPS刺激C1LR細胞組比較增殖能力明顯增強；NO分泌水平明顯增多；吞噬功能有所提高。 4LL-37基因?qū)AW264.7細胞LPS-TLR4介導的信號通路的影響 探討LL-37基因?qū)AW264.7細胞活化是否通過LPS-TLR4信號通路介導。采用RT-PCR法檢測TLR4的表達，結果顯示，經(jīng)過LPS刺激的C1LR細胞TLR4mRNA表達上調(diào)。繼而，檢測了LPS-TLR4信號通路中關鍵接頭蛋白分子及下游炎性因子的mRNA表達變化情況。結果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)LPS處理后，C1LR細胞上MyD88、TRAF-6的mRNA表達上調(diào)，并且NF-κB表達轉(zhuǎn)錄入核。TNF-α、IL-1β的mRNA表達上調(diào)。 本研究結果提示：LL-37基因可以促進小鼠巨噬細胞RAW264.7的活化；LL-37基因可以通過LPS-TLR4介導的信號轉(zhuǎn)導通路參與活化巨噬細胞。為抗菌肽在巨噬細胞介導的免疫調(diào)節(jié)及其作用機制與臨床應用方面研究奠定了實驗基礎并提供了新的科研資料。
【關鍵詞】：LL-37 基因轉(zhuǎn)染 RAW264.7細胞 TLR4 NF-κB
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 提要4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-14
• 引言14-15
• 文獻綜述15-24
• 1 LL-37 的發(fā)現(xiàn)和免疫生物學功能15-20
• 1.1 LL-37 的發(fā)現(xiàn)與結構及表達15-17
• 1.2 LL-37 的免疫生物學效應17-20
• 2 巨噬細胞的活化類型及功能20-21
• 2.1 巨噬細胞的活化類型20
• 2.2 巨噬細胞的主要生物學功能20-21
• 3 TLR4 及其信號轉(zhuǎn)導通路途徑21-24
• 3.1 Toll 樣受體及其表達21-22
• 3.2 TLR4 及其信號轉(zhuǎn)導通路22-23
• 3.3 Toll 樣受體與 LL-3723-24
• 課題設計思路24-26
• 實驗研究26-56
• 1 材料和方法26-38
• 1.1 細胞株26
• 1.2 質(zhì)粒26
• 1.3 主要試劑26-27
• 1.4 主要試劑的配制27-29
• 1.5 主要實驗儀器29-30
• 1.6 實驗方法30-38
• 2 結果38-52
• 2.1 建立穩(wěn)定表達 LL-37 基因的 RAW264.7 細胞系38-43
• 2.2 LL-37 基因?qū)?RAW264.7 細胞系活化功能的影響43-45
• 2.3 LPS 對穩(wěn)定表達 LL-37 的 RAW264.7 細胞活化功能的影響45-48
• 2.4 LL-37 基因?qū)?RAW264.7 細胞 LPS-TLR4 信號通路及其下游信號分子的表達影響48-52
• 3 討論52-55
• 3.1 LL-37 基因?qū)奘杉毎罨挠绊?/span>53-54
• 3.2 LL-37 基因?qū)?LPS-TLR4 介導的巨噬細胞活化及下游信號分子的表達變化的影響54-55
• 4 結論55-56
• 參考文獻56-64
• 致謝64

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 李棟;程海波;王明艷;李黎;吳勉華;;消癌解毒方加入LPS及CD284對人肝癌細胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2012年11期

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本文編號：843365