本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣蛋白基因功能的初步研究

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【摘要】：目的探索日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣蛋白(chymotrypsin-like protease)在終宿主體內(nèi)的基因表達(dá)、定位和潛在功能,評(píng)估該蛋白在小鼠抗血吸蟲感染中的免疫保護(hù)力。方法利用軟件分析日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣蛋白(Sj CTRL)基因(Gen Bank登錄號(hào)為FN317561.1)的理化特性,及與其他物種同源基因的種系發(fā)生關(guān)系。采用整體原位雜交法定位Sj CTRL基因轉(zhuǎn)錄本在d26成蟲中的表達(dá)部位。利用實(shí)時(shí)定量熒光PCR方法監(jiān)測(cè)感染后14、18、22和26 d等4個(gè)發(fā)育時(shí)期雌雄蟲的Sj CTRL基因轉(zhuǎn)錄水平。制備Sj CTRL-ds RNA,采用體外浸泡法對(duì)d26合抱雌雄蟲進(jìn)行RNA干擾,并利用共聚焦顯微鏡觀察被干擾蟲體的形態(tài)學(xué)變化。設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增去除跨膜結(jié)構(gòu)的編碼基因序列,并克隆至p ET-28a原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后進(jìn)行原核表達(dá)。將純化重組蛋白免疫C57BL/6小鼠,用尾蚴(40±2條/鼠)攻擊感染進(jìn)行動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)。同時(shí)設(shè)對(duì)照組。感染后35 d收集蟲體和肝臟,統(tǒng)計(jì)減蟲率、每克肝組織減卵率。結(jié)果原位雜交定位結(jié)果顯示,該基因轉(zhuǎn)錄本位于雌蟲后段腸道。Sj CTRL基因僅在d26雌蟲體內(nèi)有較高的轉(zhuǎn)錄本豐度。Sj CTRL-ds RNA干擾后雌蟲相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄本的相對(duì)表達(dá)量降至25.7%(P0.05),但未有可觀察到的形態(tài)學(xué)變化。構(gòu)建了p ET-28a/Sj CTRL重組質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)獲得不可溶重組蛋白。免疫保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果顯示,減蟲率為25.4%,減卵率為80.5%。結(jié)論初步探明日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣蛋白基因僅在d26雌蟲的后段腸道高轉(zhuǎn)錄,體外干擾可降低Sj CTRL基因的轉(zhuǎn)錄本水平,該蛋白可一定程度上減少感染日本血吸蟲的C57BL/6小鼠的成蟲數(shù)和肝臟蟲卵數(shù)。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲 胰凝乳蛋白酶樣蛋白 原位雜交 RNA干擾 免疫保護(hù)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81271867)~~
【分類號(hào)】：R383.24
【正文快照】： (1 School of Life Science,Fudan University,Shanghai 200433,China;2 National Institute of ParasitcDiseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Shanghai 200025,China)蛋白水解酶是血吸蟲在脊椎動(dòng)物體內(nèi)寄生的關(guān)鍵蛋白,參與了血吸蟲尾蚴侵染宿主以及

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本文編號(hào)：832967