本文關(guān)鍵詞：DLX1對(duì)BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響

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【摘要】：為了研究同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子家族成員DLX1對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響,骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（bone morphogenetic proteins9,BMP9）作用于小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2、小鼠胚胎成纖維細(xì)胞iMEFs和小鼠成肌細(xì)胞C2C12，通過(guò)PCR和Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BMP9可以促進(jìn)DLX1的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)。過(guò)表達(dá)DLX1的重組腺病毒感染C3H10T1/2細(xì)胞、iMEFs細(xì)胞和C2C12細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上再用BMP9腺病毒的條件培養(yǎng)基處理細(xì)胞，分別利用化學(xué)發(fā)光法和染色法定量和定性地檢測(cè)早期的成骨分化指標(biāo)堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）的活性，發(fā)現(xiàn)BMP9可以促進(jìn)細(xì)胞的ALP活性升高，并且在C3H10T1/2細(xì)胞中，DLX1可以促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的細(xì)胞ALP的活性。值得注意的是，在iMEFs細(xì)胞中，雖然BMP9可以誘導(dǎo)其ALP活性升高，但是DLX1對(duì)BMP9的誘導(dǎo)作用卻沒(méi)有明顯影響。而對(duì)C2C12細(xì)胞而言，BMP9誘導(dǎo)的ALP活性會(huì)受到DLX1的抑制。用同樣的處理方式作用于C3H10T1/2細(xì)胞，分別使用Western Blot和PCR檢測(cè)成骨指標(biāo)Osteopontin（OPN）和Osteocalcin（OCN）的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，BMP9可以促進(jìn)OPN和OCN的表達(dá)，而DLX1能進(jìn)一步增強(qiáng)BMP9對(duì)其表達(dá)的誘導(dǎo)作用。同樣的方法處理C3H10T1/2細(xì)胞和iMEFs細(xì)胞后，通過(guò)茜素紅染色檢測(cè)晚期成骨指標(biāo)鈣鹽沉積，發(fā)現(xiàn)BMP9可以誘導(dǎo)細(xì)胞的鈣鹽沉積增多，而且DLX1可以增強(qiáng)BMP9對(duì)其的誘導(dǎo)作用。為了進(jìn)一步驗(yàn)證DLX1對(duì)成骨分化的作用，采用腺病毒DLX1感染C3H10T1/2細(xì)胞，在BMP9的作用下，利用PCR技術(shù)檢測(cè)成骨分化的標(biāo)志性基因inhibitor of deifferentiation1（Id1）、Id2、Id3、Osterix、osteoprotegerin（OPG）、DLX5、connective tissue growth factor（CTGF）和Runt-related transcription factor2（Runx2）的表達(dá)，，發(fā)現(xiàn)BMP9均可誘導(dǎo)靶基因的表達(dá)，并且DLX1可以促進(jìn)BMP9對(duì)靶基因表達(dá)的誘導(dǎo)作用。DLX1腺病毒和BMP9條件培養(yǎng)基作用于C3H10T1/2細(xì)胞后，通過(guò)檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因的活性和Western Blot來(lái)探索DLX1與Smad信號(hào)通路之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DLX1和BMP9均可以增強(qiáng)Smad熒光素酶報(bào)告基因的活性，并且DLX1可以促進(jìn)BMP9的作用；Western印跡顯示，DLX1不影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8的磷酸化水平，兩者對(duì)總蛋白水平?jīng)]有影響。為了更全面地驗(yàn)證DLX1對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響，構(gòu)建了4個(gè)DLX1的siRNA質(zhì)粒并將其成功包裝成腺病毒，用此腺病毒分別感染C3H10T1/2細(xì)胞，利用PCR和Western Blot驗(yàn)證其干擾是否有效，結(jié)果表明這4種腺病毒均能有效地干擾DLX1的表達(dá)。4種腺病毒采用不同感染效率的劑量分別處理C3H10T1/2細(xì)胞，在BMP9作用的基礎(chǔ)上，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和染色法檢測(cè)成骨分化指標(biāo)ALP的活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在4種siRNA腺病毒中，有兩種在低感染效率和高感染效率時(shí)對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞中由BMP9誘導(dǎo)的ALP活性的作用不同：低感染效率時(shí)可以促進(jìn)其ALP活性，而高感染效率時(shí)對(duì)其活性的影響則表現(xiàn)為抑制。其他兩種腺病毒對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞中BMP9誘導(dǎo)的ALP活性的影響均表現(xiàn)為抑制。上述結(jié)果表明DLX1能夠促進(jìn)由BMP9所誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化，而干擾DLX1會(huì)影響B(tài)MP9的這種作用。對(duì)Smad1/5/8的熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)和Western Blot的結(jié)果分析表明，DLX1影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化作用可能是通過(guò)影響Smad1/5/8的轉(zhuǎn)錄活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：DLX1 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-14
• 1 材料和方法14-23
• 2 結(jié)果23-33
• 3 討論33-37
• 全文總結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 文獻(xiàn)綜述42-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52-53

【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：823012