本文關(guān)鍵詞：羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 組織工程皮膚 羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞 羊膜上皮細(xì)胞 共培養(yǎng) 分化

【摘要】：目的：1.從人足月胎盤(pán)羊膜中分離羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞和羊膜上皮細(xì)胞，建立相應(yīng)培養(yǎng)體系，體外共培養(yǎng)兩種細(xì)胞探究?jī)烧叨S共培養(yǎng)中的相互影響關(guān)系。2.分析鑒定羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（human amniotic mesenchymal stem cells, hAMSC）和羊膜上皮細(xì)胞(human amnion epithelial cells, hAEC)的干細(xì)胞特性以及羊膜上皮細(xì)胞作為組織工程皮膚表層種子細(xì)胞與人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的相似性。3.通過(guò)三維氣液培養(yǎng)以羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚。 方法：取人足月剖宮產(chǎn)胎兒胎盤(pán)機(jī)械剖離羊膜，通過(guò)胰酶、膠原酶分步消化分離培養(yǎng)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（hAMSC）、羊膜上皮細(xì)胞（hAEC)，通過(guò)流式細(xì)胞分析術(shù)鑒定兩種細(xì)胞CD90等表型情況，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)基因CMYC等的表達(dá)情況以鑒定hAMSC與hAEC在基因表達(dá)水平的干細(xì)胞特性，同時(shí)RT-PCR檢測(cè)hAEC、hKRT19等基因的表達(dá)，免疫熒光染色檢測(cè)hAEC K14的表達(dá)情況以鑒定其與人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的相似性同時(shí)說(shuō)明其作為組織工程皮膚種子細(xì)胞的可行性。將兩種細(xì)胞按一定比例進(jìn)行二維混合培養(yǎng)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，研究?jī)烧叨S共培養(yǎng)中的相互影響關(guān)系。最后以鼠I型膠原為基質(zhì)用兩種細(xì)胞氣液三維培養(yǎng)構(gòu)建組織工程皮膚，HE染色切片觀察。 結(jié)果：（1）成功分離培養(yǎng)了hAMSC和hAEC，體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中hAEC生長(zhǎng)狀態(tài)良好具有較快的增殖速度，表型無(wú)明顯改變；（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)體外培養(yǎng)hAMSC和hAEC均高表達(dá)CD90、CD73、CD105，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34以及MHC-II類(lèi)分子HLA-DR。RT-PCR檢測(cè)到hAMSC表達(dá)干細(xì)胞特性基因CMCY和NANOG，hAEC表達(dá)干細(xì)胞特性基因CMCY和KLF4，RT-PCR檢測(cè)hAMSC表達(dá)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞特性基因K19、β1-integrin、K8，，hAEC表達(dá)K19、β1-integrin、K5、K8，免疫熒光染色見(jiàn)hAEC表達(dá)與角質(zhì)形成細(xì)胞增殖相關(guān)的的特性蛋白K14；(3)通過(guò)氣液培養(yǎng)利用兩種細(xì)胞成功構(gòu)建組織工程皮膚，HE染色切片顯示其具有一定的皮膚結(jié)構(gòu)，且hAEC發(fā)生了初步分化。 結(jié)論：hAMSC與hAEC均有一定的干細(xì)胞特性，hAEC與皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞更具相似性，在特定條件下更易于分化為皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞。共培養(yǎng)結(jié)果顯示在三維工程皮膚的培養(yǎng)中生長(zhǎng)于基質(zhì)部分的hAMSC對(duì)表層的hAEC可以起到一定的滋養(yǎng)作用。本研究通過(guò)氣液培養(yǎng)成功構(gòu)建了組織工程皮膚，證實(shí)了hAMSC與hAEC通過(guò)三維培養(yǎng)構(gòu)建人工皮膚組織是可行的。
【關(guān)鍵詞】：組織工程皮膚 羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞 羊膜上皮細(xì)胞 共培養(yǎng) 分化
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-13
• 第一部分 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞和人羊膜上皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)與生物學(xué)特性鑒定13-26
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-23
• 討論23-26
• 第二部分 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞與人羊膜上皮細(xì)胞體外共培養(yǎng)并構(gòu)建組織工程皮膚26-38
• 材料與方法26-29
• 結(jié)果29-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-46
• 綜述：人胎膜來(lái)源干細(xì)胞的研究進(jìn)展46-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文59-60
• 縮略詞表60-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：814122