本文關(guān)鍵詞：人巨細(xì)胞病毒通過NF-κB信號途徑誘導(dǎo)人星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)IL-6和IL-8

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【摘要】：目的： 1.觀察人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalo virus, HCMV)感染對人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞IL-6和IL-8的表達(dá)變化。 2.探討核因子κB (nuclear factor-kappa B, NF-κB)在HCMV感染致人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌改變中的作用。 方法： 1.在人胚肺成纖維細(xì)胞中擴(kuò)增HCMV病毒,并用空斑定量法測定病毒滴度。 2.原代培養(yǎng)人星形膠質(zhì)細(xì)胞,免疫熒光法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白—膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP),計算細(xì)胞純度。 3. HCMV感染人星形膠質(zhì)細(xì)胞,RT-PCR和免疫熒光法檢測HCMV-IE,確定HCMV能否在人原代星形膠質(zhì)中建立感染。 4. RT-PCR和Western blotting檢測HCMV感染導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的IL-6和IL-8表達(dá)變化。 5.免疫熒光法檢測NF-κB的細(xì)胞核移位,Western blotting檢測阻斷NF-κB細(xì)胞核移位后,IL-6和IL-8的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1. HCMV感染人胚肺成纖維細(xì)胞5d左右,超過80%細(xì)胞出現(xiàn)典型細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE),呈典型的巨細(xì)胞病毒感染后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。空斑測定結(jié)果顯示將病毒液稀釋10-5倍后,平均空斑數(shù)為5.5,計算后空斑形成單位為1.1×107pfu/ml。 2.分離、純化的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,經(jīng)免疫熒光染色后在倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞有較強(qiáng)的特異性綠色熒光,GFAP陽性率達(dá)到95%以上 3. RT-PCR和western blotting結(jié)果顯示感染HCMV的星形膠質(zhì)細(xì)胞均可檢測到HCMV-IE的表達(dá),而未感染的細(xì)胞則檢測不到。 4. RT-PCR檢測HCMV感染人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞0、6、12、24、48和96h時mRNA比值IL-6/β-actin分別為0.23±0.05、1.31±0.07、1.18±0.05、1.13±0.04、0.74±0.02和0.67±0.04,IL-8/β-actin分別為0、0.65±0.04、0.54±0.06、0.42±0.04、0.19±0.03和0.36±0.05。感染組IL-6和IL-8mRNA的表達(dá)較未感染細(xì)胞差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。Western blotting檢測感染0、36、48、72、96和120h時蛋白比值IL-6/β-actin分別為0.043±0.01、0.931±0.02、0.852±0.05、0.983±0.03、1.32±0.02不和0.95±0.02,IL-8/β-actin分別為0、0.42±0.01、0.61±0.02、1.12±0.03、1.55±0.02和10.81±0.04。感染組IL-6和IL-8蛋白的表達(dá)較未感染細(xì)胞差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 5.免疫熒光結(jié)果顯示HCMV (?)感染原代星形膠技細(xì)胞2、4、7h時,NF-κB發(fā)生了細(xì)胞核移位,其中7h的細(xì)胞核移位最為明顯；而用10μM PDTC(NF-κB活化的抑制劑)孵育的細(xì)胞用HCMV感染時未見明顯的NF-κB細(xì)胞核移位。Western blotting檢測未染毒、PDTC孵育、HCMV感染及HCMV與PDTC共同作用的細(xì)胞蛋白比值IL-6/β-actin分別為0.023±0.01、0.017±0.03、1.642±0.01和0.102±0.01,IL-8/β-actin分別為0、0、1.12±0.01和0HCMV感染細(xì)胞IL-6和IL-8蛋白的表達(dá)較其它三組細(xì)胞差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1.HCMV能夠在人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中建立感染。 2.HCMV感染誘導(dǎo)人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌IL-6和IL-8。, 3.HCMV感染致星形質(zhì)細(xì)胞分泌的IL-6和IL-8表達(dá)異常是通過活化NF-κB實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：人巨細(xì)胞病毒 人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞 白細(xì)胞介素6 白細(xì)胞介素8 NF-κB信號通路
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 實驗材料10-16
• 1.1 細(xì)胞10
• 1.2 病毒10
• 1.3 實驗儀器和設(shè)備10-11
• 1.4 主要實驗試劑及配制11-16
• 第二章 實驗方法16-28
• 2.1 細(xì)胞的獲取及保存16-18
• 2.2 HCMV AD169株毒種的增殖和滴度測定18-19
• 2.3 HCMV感染人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞模型的建立19-20
• 2.4 HCMV感染對人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞IL-6和IL-8表達(dá)的影響20-26
• 2.5 免疫熒光法檢測NF-κB的核移位及其與IL-6和IL-8表達(dá)異常的關(guān)系26
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析26-28
• 第三章 實驗結(jié)果28-36
• 3.1 原代細(xì)胞的培養(yǎng)28-29
• 3.2 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定29
• 3.3 HCMV AD169毒株的增殖和定量29-30
• 3.4 HCMV感染人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞模型的建立30-32
• 3.5 HCMV感染人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞后IL-6和IL-8的表達(dá)變化32-33
• 3.6 免疫熒光法檢測NF-κB的轉(zhuǎn)位及其與IL-6和IL-8表達(dá)異常的關(guān)系33-36
• 第四章 討論36-40
• 4.1 HCMV的基因組成及其調(diào)控宿主基因表達(dá)的關(guān)鍵基因36
• 4.2 NF-κB信號通路及其調(diào)控的炎性因子36-37
• 4.3 HCMV感染星形膠質(zhì)細(xì)胞及其致神經(jīng)系統(tǒng)損傷致病機(jī)制的討論37-40
• 第五章 結(jié)論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 文獻(xiàn)綜述44-58
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果58-60
• 致謝60-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 侯云;李玲;胡明;姜光域;王倩;錢冬萌;閆志勇;趙巍;宋旭霞;王斌;;HSV-1感染對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞神經(jīng)生長因子及其受體表達(dá)的影響[J];病毒學(xué)報;2010年06期

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本文編號：812264