本文關(guān)鍵詞：抗人B7-1及B7-2雙特異性抗體的構(gòu)建、表達(dá)及與抗原結(jié)合的特性分析

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【摘要】：目的:構(gòu)建及表達(dá)抗人B7-1及B7-2雙特異性抗體(anti-B7-1/B7-2-Bs Ab),并分析其與相應(yīng)抗原結(jié)合的特性。方法:采用PCR的方法分別從重組質(zhì)粒中克隆出抗人B7-1及B7-2單鏈抗體基因,將其克隆入p IRES2-EGFP表達(dá)載體,并用6×His為純化的標(biāo)簽。用脂質(zhì)體法將兩個基因轉(zhuǎn)染入中華倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO),經(jīng)G418加壓篩選高表達(dá)株,擴(kuò)大培養(yǎng)并收集上清純化。分析抗體對膜型B7-1及B7-2的識別及與其相應(yīng)抗原的結(jié)合能力。以天然高表達(dá)B7-1及B7-2分子的Raji細(xì)胞用絲裂霉素處理后作為APC,人PBMC為效應(yīng)細(xì)胞,分析抗體通過阻斷B7-CD28共刺激信號對PBMC增殖的影響。結(jié)果:獲得了穩(wěn)定表達(dá)抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO細(xì)胞株及相應(yīng)的抗體。該抗體與B7-1及B7-2基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株L929-B7-1及L929-B7-2的陽性結(jié)合率分別為99.5%及62.0%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab對抗人B7-1及B7-2單鏈抗體的競爭結(jié)合率分別為0.4%及32.4%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab通過阻斷B7-CD28共刺激信號使PBMC的增殖效應(yīng)僅為陰性對照組的59.7%。結(jié)論:成功構(gòu)建了穩(wěn)定分泌抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO細(xì)胞株(命名為SA-VI)。該抗體可以識別B7-1及B7-2分子并具有良好的生物學(xué)活性。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院免疫學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： B- B- 雙特異性抗體 CHO 共表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81373236)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： B7-1(又稱CD80)及B7-2(又稱CD86)是表達(dá)子,同屬B7家族,其相對應(yīng)的受體是表達(dá)在T細(xì)胞在抗原遞呈細(xì)胞(APC)表面的重要的協(xié)同刺激分表面的CD28家族分子[1,2]。B7-1與B7-2分子在不 同的時相與T細(xì)胞相互作用產(chǎn)生共刺激信號。由的TAG序列)以上引物由金斯瑞生物科技公司于B7-2的表達(dá)

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本文編號：807932