本文關(guān)鍵詞：大鼠胚胎著床時支配子宮的植物性神經(jīng)對β-catenin、Wnt-1表達(dá)的影響

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【摘要】：生殖活動是由神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)共同參與的過程,妊娠過程是一個復(fù)雜的生理過程,而一個成功的妊娠過程中胚胎著床是非常重要的,在著床窗口期胚囊經(jīng)過附著、粘附、滲透和滋養(yǎng)層浸潤來完成著床過程。這個過程是神經(jīng)遞質(zhì)、內(nèi)分泌激素、細(xì)胞因子和免疫細(xì)胞協(xié)同作用的結(jié)果。Wnt信號通路作為細(xì)胞信號傳導(dǎo)系統(tǒng)之一與胚胎著床聯(lián)系密切。但是有關(guān)植物性神經(jīng)對胚胎著床過程中Wnt細(xì)胞信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)影響的資料很少。因此,本試驗(yàn)?zāi)康木褪怯^察支配子宮的植物性神經(jīng)損毀或功能抑制處理是否影響著床期子宮內(nèi)Wnt信號通路的關(guān)鍵分子β-連接蛋白(β-catenin)和Wnt-1的動態(tài)表達(dá)。 本試驗(yàn)通過手術(shù)和化學(xué)損毀方法去除或抑制支配大鼠子宮的植物性神經(jīng)作用,觀察大鼠著床情況；應(yīng)用免疫組化法定位觀察了不同處理組的大鼠在妊娠4d、5d、6d子宮中P-catenin和Wnt-1免疫陽性細(xì)胞的分布規(guī)律；應(yīng)用實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù),分析β-catenin mRNA和Wnt-1mRNA的表達(dá)量的差異性。結(jié)果表明：(1)阻斷支配子宮的植物性神經(jīng)作用后,在妊娠5d并未看到著床點(diǎn)或其數(shù)量比較少,子宮腺上皮細(xì)胞發(fā)生不同程度的空泡和和核固縮現(xiàn)象影響了子宮腺的正常分泌,進(jìn)而推遲了胚泡著床。(2)在妊娠4d-6d的大鼠子宮中,β-catenin免疫陽性細(xì)胞分布在腔上皮下邊基質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)中；Wnt-1免疫陽性細(xì)胞分布在基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)、子宮腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜以及子宮腔上皮細(xì)胞中偶有分布。在妊娠4d-6d子宮基質(zhì)中的β-catenin和Wnt-1表達(dá)數(shù)量有所變化,且神經(jīng)阻斷后對其數(shù)量影響明顯。正常妊娠4d中β-catenin和Wnt-1免疫陽性表達(dá)出現(xiàn)高峰,而在妊娠5d明顯減少,妊娠6d又開始增加；交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)全部阻斷后,β-catenin和Wnt-1陽性基質(zhì)細(xì)胞隨著妊娠時間的變化呈現(xiàn)上升趨勢,且較之正常組各階段明顯升高；阻斷交感神經(jīng)后,β-catenin和Wnt-1陽性基質(zhì)細(xì)胞隨妊娠時間的變化呈現(xiàn)上升趨勢,但明顯低于正常組各階段的陽性表達(dá)；阻斷副交感神經(jīng)后,β-catenin和Wnt-1陽性基質(zhì)細(xì)胞與正常組的變化趨勢一致,但是在妊娠5d表達(dá)較正常5d明顯增加。這些結(jié)果提示神經(jīng)損毀后β-catenin和Wnt-1的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正�；虮磉_(dá)量不足,通過這些變化而影響正常著床窗口期子宮內(nèi)膜的正常發(fā)育,神經(jīng)損毀后影響正常的表達(dá)分布,不能提供適宜的胚泡發(fā)育及著床的內(nèi)環(huán)境,從而使胚泡著床延遲或著床數(shù)減少。我們通過qRT-PCR法mRNA的水平也發(fā)現(xiàn)了同樣的變化規(guī)律,進(jìn)一步驗(yàn)證了結(jié)果可靠。 總之,支配子宮的植物性神經(jīng)損毀影響胚胎著床使胚胎著床延遲或著床數(shù)減少,妊娠早期子宮中的β-catenin及Wnt-1的表達(dá)異�？赡苁巧窠�(jīng)影響胚胎著床的重要機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：植物性神經(jīng) Wnt/β-catenin信號通路 胚胎著床 β-catenin Wnt-1
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R321
【目錄】：

• 符號說明4-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 前言12-31
• 1.1 子宮與植物性神經(jīng)12-15
• 1.1.1 哺乳動物子宮的結(jié)構(gòu)與功能12-15
• 1.1.2 子宮的植物性神經(jīng)15
• 1.2 Wnt信號通路15-24
• 1.2.1 Wnt家族15-18
• 1.2.1.1 Wnt及其受體15-16
• 1.2.1.3 結(jié)腸腺瘤樣息肉病蛋白16
• 1.2.1.4 軸蛋白16-17
• 1.2.1.5 糖原合成酶激酶3β17
• 1.2.1.6 T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子/淋巴樣增強(qiáng)因子17
• 1.2.1.7 下游靶基因17-18
• 1.2.2 非經(jīng)典信號通路18
• 1.2.2.1 Wnt/Ca~(2+)通路18
• 1.2.2.2 Wnt/平面細(xì)胞極性通路(Wnt/PCP通路)18
• 1.2.3 經(jīng)典信號通路(Wnt/β-catenin通路)18-19
• 1.2.3.1 經(jīng)典信號通路組成18
• 1.2.3.2 通路反應(yīng)18-19
• 1.2.4 Wnt信號通路與哺乳動物的生殖19-22
• 1.2.4.1 Wnt信號通路與生殖系統(tǒng)早期發(fā)育19-20
• 1.2.4.2 發(fā)情周期及妊娠中的Wnt信號通路20-22
• 1.2.5 Wnt信號通路與動物的胚胎發(fā)育及腫瘤發(fā)生22-24
• 1.2.5.1 早期胚胎發(fā)育與腫瘤發(fā)生的相似性22-23
• 1.2.5.2 Wnt信號通路在胚胎發(fā)育與腫瘤發(fā)生過程中的作用23-24
• 1.3 β-catenin的研究進(jìn)展24-27
• 1.3.1 β-catenin的結(jié)構(gòu)與功能24-25
• 1.3.2 β-catenin與胚胎發(fā)育及腫瘤發(fā)生25-27
• 1.4 Wnt-1的研究進(jìn)展27-29
• 1.4.1 Wnt及Wnt-1的發(fā)現(xiàn)與功能27-28
• 1.4.2 Wnt-1與胚胎發(fā)育及腫瘤發(fā)生28-29
• 1.5 胚胎著床與子宮內(nèi)膜容受性29-30
• 1.6 本研究的目的和意義30-31
• 2 材料與方法31-40
• 2.1 試驗(yàn)材料31-33
• 2.1.1 試驗(yàn)動物31-32
• 2.1.2 主要試劑和試驗(yàn)用品32-33
• 2.1.2.1 試驗(yàn)主要試劑及來源32
• 2.1.2.2 主要的試驗(yàn)儀器32-33
• 2.1.2.3 主要生物學(xué)數(shù)據(jù)庫和相關(guān)生物學(xué)軟件33
• 2.2 觀察雌性大鼠發(fā)情規(guī)律變化33-34
• 2.3 交感神經(jīng)損毀情況檢測34
• 2.4 免疫組織化學(xué)方法檢測子宮β-catenin和Wnt-1蛋白的陽性分布34-35
• 2.4.1 切片標(biāo)本制備34
• 2.4.2 HE染色34-35
• 2.4.3 免疫組織化學(xué)方法的具體步驟35
• 2.4.4 免疫組織化學(xué)方法結(jié)果統(tǒng)計(jì)35
• 2.5 Western blot法測定大鼠子宮中β-catenin和Wnt-1蛋白的含量35-37
• 2.5.1 總蛋白的提取35-36
• 2.5.2 總蛋白的濃度測定36
• 2.5.3 考馬斯亮藍(lán)染色確定蛋白質(zhì)上樣量36
• 2.5.4 Western blot方法的具體步驟36-37
• 2.5.5 Western blot的結(jié)果統(tǒng)計(jì)37
• 2.6 實(shí)時熒光定量法測定β-catenin mRNA、Wnt-1 mRNA相對表達(dá)量37-40
• 2.6.1 總RNA的提取37
• 2.6.2 提取的總RNA質(zhì)量鑒定37
• 2.6.3 引物設(shè)計(jì)及RT-PCR擴(kuò)增37-40
• 2.6.3.1 引物的設(shè)計(jì)合成37-38
• 2.6.3.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)38
• 2.6.3.3 PCR 反應(yīng)38-39
• 2.6.3.4 RT-PCR產(chǎn)物的分析39
• 2.6.3.5 RT-PCR的條件優(yōu)化39
• 2.6.3.6 RT-PCR數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析39-40
• 3 結(jié)果及分析40-56
• 3.1 不同劑量6-OHDA對支配子宮的交感神經(jīng)損毀程度的觀察結(jié)果40
• 3.2 神經(jīng)損毀對子宮著床點(diǎn)和排卵點(diǎn)的影響40-41
• 3.3 神經(jīng)損毀對子宮組織結(jié)構(gòu)的影響41-43
• 3.4 β-catenin和Wnt-1免疫陽性細(xì)胞在子宮內(nèi)的分布規(guī)律43-50
• 3.4.1 β-catenin免疫陽性細(xì)胞在子宮內(nèi)的分布規(guī)律43-47
• 3.4.2 Wnt-1免疫陽性細(xì)胞在子宮內(nèi)的分布規(guī)律47-50
• 3.5 β-catenin和Wnt-1表達(dá)的Western Blot分析50-53
• 3.6 β-catenin和Wnt-1表達(dá)的qRT-PCR檢測53-56
• 3.6.1 熔解曲線分析53
• 3.6.2 總RNA及qRT-PCR產(chǎn)物驗(yàn)證53-54
• 3.6.3 β-catenin和Wnt-1 mRNA表達(dá)的變化54-56
• 4 討論56-60
• 4.1 植物性神經(jīng)損毀對子宮腺體的影響56
• 4.2 植物性神經(jīng)損毀對子宮中β-catenin和Wnt-1的影響56-58
• 4.3 6-羥多巴胺最佳劑量確定58-60
• 5 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-71
• 致謝71

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 蘇姍;闞艷艷;田永杰;;sFRP-1、Wnt-1在宮頸癌及癌前病變中的表達(dá)及意義[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

2 孫曉陽,王雁玲;Wnt信號通路與哺乳動物生殖[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2003年02期

3 韓萍萍;鄭若男;;Wnt信號通路及其與疾病的關(guān)系[J];生物技術(shù)通報(bào);2009年11期

4 靳文劍;陳火國;鐘禮瀑;汪凌玲;張q和;;β-catenin的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[J];實(shí)用癌癥雜志;2006年04期

5 李東輝;李明眾;張薛榜;;β-catenin和Ki-67在人宮頸癌組織中的表達(dá)及其意義[J];實(shí)用癌癥雜志;2007年01期

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本文編號：804531