本文關鍵詞：慢病毒載體表達外源PON1對小鼠巨噬細胞的影響

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【摘要】：目的:為探討對氧磷酯酶1(PON1)在機體代謝性疾病中的作用及機制,本實驗構(gòu)建含人源性PON1基因的慢病毒表達載體,研究其表達分泌PON1的能力及對小鼠巨噬細胞的影響。方法:根據(jù)人肝cDNA文庫的PON1序列設計特定引物,定點誘變PCR獲得兩端為PmeⅠ內(nèi)切酶位點的目的基因,經(jīng)酶切連接到pWPI-GFP載體上,篩選及DNA測序鑒定。磷酸鈣法瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞,熒光顯微鏡觀察GFP表達反映轉(zhuǎn)染效率,Western Blotting檢測細胞培養(yǎng)基中PON1分泌表達量,采用對氧磷為底物檢測PON1活性。含PON1的培養(yǎng)基與小鼠腹腔巨噬細胞共孵育,ELISA法檢測氧化條件下細胞分泌腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)的水平。結(jié)果:構(gòu)建的pWPI-PON1慢病毒表達載體序列正確,高效轉(zhuǎn)染293T細胞(轉(zhuǎn)染效率可達到80%-90%)可有效分泌表達PON1至培養(yǎng)基,顯著提高培養(yǎng)基PON1活性,與對照組相比,培養(yǎng)基中PON1可明顯抑制巨噬細胞炎癥因子TNF-α、IL-6的分泌(P0.01)。結(jié)論:pWPI-PON1慢病毒載體高效表達分泌的外源PON1能有效降低巨噬細胞的炎癥反應。
【作者單位】： 武漢大學基礎醫(yī)學院生物化學與分子生物學系;
【關鍵詞】： 對氧磷酯酶 慢病毒載體 巨噬細胞 TNF-α
【基金】：國家自然科學基金資助項目(編號:30770850,81270364)
【分類號】：R363.1
【正文快照】： 對氧磷酯酶(Paraoxonase,PON)是一類鈣依賴性的催化水解磷酸酯鍵的芳香酯酶,因其常見底物為對氧磷而命名。其包括PON1、PON2和PON3三種亞型,其中PON1主要由肝臟合成分泌入血、高親和結(jié)合于高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),是HDL發(fā)揮抗氧化及抗炎的主要成分[1]。大

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本文編號：802979