本文關鍵詞：慢病毒載體表達外源PON1對小鼠巨噬細胞的影響

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【摘要】：目的:為探討對氧磷酯酶1(PON1)在機體代謝性疾病中的作用及機制,本實驗構建含人源性PON1基因的慢病毒表達載體,研究其表達分泌PON1的能力及對小鼠巨噬細胞的影響。方法:根據(jù)人肝cDNA文庫的PON1序列設計特定引物,定點誘變PCR獲得兩端為PmeⅠ內切酶位點的目的基因,經酶切連接到pWPI-GFP載體上,篩選及DNA測序鑒定。磷酸鈣法瞬時轉染293T細胞,熒光顯微鏡觀察GFP表達反映轉染效率,Western Blotting檢測細胞培養(yǎng)基中PON1分泌表達量,采用對氧磷為底物檢測PON1活性。含PON1的培養(yǎng)基與小鼠腹腔巨噬細胞共孵育,ELISA法檢測氧化條件下細胞分泌腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)的水平。結果:構建的pWPI-PON1慢病毒表達載體序列正確,高效轉染293T細胞(轉染效率可達到80%-90%)可有效分泌表達PON1至培養(yǎng)基,顯著提高培養(yǎng)基PON1活性,與對照組相比,培養(yǎng)基中PON1可明顯抑制巨噬細胞炎癥因子TNF-α、IL-6的分泌(P0.01)。結論:pWPI-PON1慢病毒載體高效表達分泌的外源PON1能有效降低巨噬細胞的炎癥反應。
【作者單位】： 武漢大學基礎醫(yī)學院生物化學與分子生物學系;
【關鍵詞】： 對氧磷酯酶 慢病毒載體 巨噬細胞 TNF-α
【基金】：國家自然科學基金資助項目(編號:30770850,81270364)
【分類號】：R363.1
【正文快照】： 對氧磷酯酶(Paraoxonase,PON)是一類鈣依賴性的催化水解磷酸酯鍵的芳香酯酶,因其常見底物為對氧磷而命名。其包括PON1、PON2和PON3三種亞型,其中PON1主要由肝臟合成分泌入血、高親和結合于高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),是HDL發(fā)揮抗氧化及抗炎的主要成分[1]。大

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1 賀正華;白念岳;郭曲練;;人白細胞介素10基因慢病毒載體的構建及重組[J];中國普通外科雜志;2008年08期

2 羅望;張泓;許淼;顧林;孫倍成;;慢病毒——基因轉移的潛在新載體[J];江蘇藥學與臨床研究;2006年06期

3 張驚宇;李金星;孫永奇;趙虹;楊子超;;大鼠海馬腦區(qū)腦源性神經營養(yǎng)因子慢病毒注射與表達的檢測[J];細胞與分子免疫學雜志;2009年07期

4 任振華;王淑艷;張穎;鄒春林;張愚;;慢病毒載體感染成年食蟹猴骨髓間充質干細胞[J];生物工程學報;2010年06期

5 張麗梅;馮龍;張艷敏;馬晶;趙國強;安玉會;鮑玉洲;;人表皮生長因子慢病毒載體的構建及表達[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2010年04期

6 鄧昭玲;王彥;杜利清;劉強;趙輝;陳乃耀;;SIRT1基因shRNA慢病毒載體構建及干擾效應檢測[J];中國組織工程研究;2012年28期

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本文編號：802979