本文關(guān)鍵詞：表達(dá)小鼠GM-CSF的非復(fù)制型重組痘苗病毒的構(gòu)建及其佐劑作用初步評(píng)價(jià)

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【摘要】：粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage Colony Stimulating Factor, GM-CSF)是一種細(xì)胞因子,可由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、NK細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌。作為一種白細(xì)胞生長(zhǎng)因子,GM-CSF可刺激干細(xì)胞向粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、噬酸性粒細(xì)胞和噬堿性粒細(xì)胞)和單核細(xì)胞方向分化,在固有免疫中發(fā)揮重要的作用。90年代以來(lái),在各類腫瘤治療的研究中,GM-CSF作為一種佐劑由病毒載體單獨(dú)表達(dá)或與一些腫瘤靶向基因、自殺基因或免疫調(diào)節(jié)分子由病毒載體共表達(dá)應(yīng)用非常廣泛[8-17]。它通過(guò)刺激樹突細(xì)胞的招募、增殖和成熟從而提高對(duì)MHCI類和Ⅱ類限制性T細(xì)胞的抗原遞呈[12,13],介導(dǎo)腫瘤破壞從而提高免疫治療效果[15]。 病毒載體表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原,可以提高其特異性免疫效果。一般應(yīng)用的有以下幾類腫瘤相關(guān)抗原：腫瘤相關(guān)的病毒抗原,癌胚抗原(Oncofetal Antigens)和突變的原癌基因或腫瘤抑制基因。但是,由于腫瘤是由自身正常組織發(fā)展而來(lái),大多數(shù)腫瘤相關(guān)抗原不能被免疫系統(tǒng)視為外來(lái)抗原而被機(jī)體識(shí)別。然而,與腫瘤相關(guān)的病毒抗原是一種非常有前途的腫瘤相關(guān)抗原,因?yàn)樗鼈儍H在腫瘤組織中表達(dá),而在正常組織中不存在。本研究采用的腫瘤相關(guān)抗原是人乳頭瘤病毒(Human Papilloma Virus, HPV)16型的E6、E7蛋白,它們正是這種特異性的腫瘤靶抗原。本科室對(duì)表達(dá)HPV16E6E7融合蛋白的非復(fù)制型痘苗病毒的小鼠免疫效果進(jìn)行了研究,但發(fā)現(xiàn)其誘發(fā)的細(xì)胞免疫反應(yīng)水平較低[7]。為了進(jìn)一步提高該疫苗的免疫效果,可采用病毒載體表達(dá)一些細(xì)胞因子,使其發(fā)揮佐劑的作用。 因此,本論文選擇非復(fù)制型痘苗病毒天壇株為載體,構(gòu)建單獨(dú)表達(dá)小鼠GM-CSF基因的重組非復(fù)制型痘苗病毒,通過(guò)與構(gòu)建的HPV16E6E7重組痘苗病毒聯(lián)合免疫,初步評(píng)價(jià)其對(duì)HPV16E7特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響,為痘苗病毒載體表達(dá)的GM-CSF作為佐劑的免疫效果研究奠定基礎(chǔ)。 本研究獲得以下主要結(jié)果： 一、成功構(gòu)建了4個(gè)痘苗病毒天壇株重組質(zhì)粒： ①pJSBH6LacZ,其H6啟動(dòng)子下帶有LacZ基因。其余3個(gè)質(zhì)粒都以它為載體基礎(chǔ)上構(gòu)建； ②pJSB75GMCSFH6LacZ,其7.5啟動(dòng)子下帶有小鼠GM-CSF基因； ③pJSB11E67H6LacZ,其11啟動(dòng)子下帶有HPV16E6E7融合基因； ④pJSB11E6775GMCSFH6LacZ,其7.5啟動(dòng)子下帶有小鼠GM-CSF基因同時(shí)11啟動(dòng)子下帶有HPV16E6E7融合基因。 二、成功構(gòu)建了表達(dá)小鼠GM-CSF基因的重組非復(fù)制型痘苗病毒rNTVJGMCSFLacZ。經(jīng)PCR產(chǎn)物測(cè)序和Western Blot鑒定,rNTVJGMCSFLacZ中正確插入了小鼠GM-CSF基因,并能分泌表達(dá)小鼠GM-CSF蛋白,而且小鼠GM-CSF具有體外生物學(xué)活性。遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,rNTVJGMCSFLacZ中的小鼠GM-CSF基因穩(wěn)定存在。 二、lNTVJGMCSFLacZ與RVVJE67聯(lián)合免疫小鼠后,有增強(qiáng)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的趨勢(shì),對(duì)體液免疫反應(yīng)的促進(jìn)作用不明顯。 總之,本論文以我國(guó)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的非復(fù)制型痘苗病毒天壇株為載體,表達(dá)了有生物學(xué)活性的(GM-CSF,并在小鼠動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)中初步證明其有增強(qiáng)特異性細(xì)胞免疫的作用。為今后以表達(dá)GM-CSF的重組痘苗病毒作為佐劑的研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 技術(shù)路線12-13
• 第一部分 小鼠GM-CSF基因和HPV16 E6 E7融合基因的非復(fù)制型痘苗病毒天壇株重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定13-29
• 1 材料13-14
• 2 方法14-24
• 3 結(jié)果24-28
• 4 小結(jié)28-29
• 第二部分 表達(dá)小鼠GM-CSF基因的重組非復(fù)制型痘苗病毒天壇株的構(gòu)建和鑒定29-43
• 1 材料29-30
• 2 方法30-37
• 3 結(jié)果37-42
• 4 小結(jié)42-43
• 第三部分 表達(dá)小鼠GM-CSF基因的重組非復(fù)制型痘苗病毒天壇株的佐劑效果初步研究43-50
• 1 材料43-44
• 2 方法44-47
• 3 結(jié)果47-49
• 4 小結(jié)49-50
• 全文結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 文獻(xiàn)綜述53-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 作者簡(jiǎn)介61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 田厚文;任皎;黃薇;范江濤;趙莉;阮力;;表達(dá)人乳頭瘤病毒16型E6/E7融合蛋白的非復(fù)制型重組痘苗病毒的構(gòu)建及免疫效果觀察[J];病毒學(xué)報(bào);2006年05期

2 馬海倫,郭斐,孫朝暉,陸柔劍,張帆,阮力;非復(fù)制型多價(jià)重組痘苗病毒粘膜與細(xì)胞免疫效果[J];病毒學(xué)報(bào);1999年01期

3 馬海倫,孫朝暉,陸柔劍,婁元梅,郭斐,張帆,阮力;同時(shí)表達(dá)多種外源基因的非復(fù)制型重組痘苗病毒的構(gòu)建[J];病毒學(xué)報(bào);1999年01期

4 金奇,陳南海,陳淑霞,黃靜,馮澤華,袁勁松,金冬雁,白宏?yáng)|,侯云德;痘苗病毒天壇株全基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的分析[J];中國(guó)科學(xué)C輯:生命科學(xué);1997年06期

5 Dennis Hoffmann;Wibke Bayer;Oliver Wildner;;In situ tumor vaccination with adenovirus vectors encoding measles virus fusogenic membrane proteins and cytokines[J];World Journal of Gastroenterology;2007年22期

6 劉強(qiáng);齊香榮;朱蓉;黃維金;阮力;李保衛(wèi);邵榮光;王佑春;;利用活體成像術(shù)對(duì)痘苗病毒小鼠體內(nèi)生物分布和表達(dá)的研究[J];中國(guó)病毒病雜志;2013年04期

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本文編號(hào)：802490