本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型微復(fù)制子的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建EV71非結(jié)構(gòu)蛋白及EV71 3C蛋白酶微復(fù)制子體系,研究微復(fù)制子的復(fù)制及表達(dá)情況。方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增綠色熒光蛋白(EGFP),利用特定酶切位點及連接酶,將目的基因片段連接至p MD19-T載體,分別構(gòu)建EV71非結(jié)構(gòu)蛋白及EV71 3C蛋白酶微復(fù)制子體系。熒光顯微鏡下觀察微復(fù)制子表達(dá)情況,實時熒光定量PCR觀察微復(fù)制子復(fù)制情況。結(jié)果 EV71非結(jié)構(gòu)蛋白微復(fù)制子及EV71 3C蛋白酶微復(fù)制子表達(dá)后,均可觀察到特異性綠色熒光,熒光強度有明顯差異;轉(zhuǎn)染后12~72 h取樣所測RNA含量幾乎不變。結(jié)論非結(jié)構(gòu)蛋白全長及3C蛋白酶啟動微復(fù)制子轉(zhuǎn)錄強度不同,所構(gòu)建微復(fù)制子不具備復(fù)制功能,提示結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)對病毒RNA復(fù)制有重要意義。
【作者單位】： 山東大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院病毒學(xué)實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 腸道病毒型 微復(fù)制子 報告基因 非結(jié)構(gòu)蛋白
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81371833) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃(2013WS0211)
【分類號】：R373
【正文快照】： 腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)從屬于小RNA病毒科腸道病毒A屬(Human enterovirus A),能引起嬰幼兒手足口病[1]。病毒核酸是單股正鏈RNA,僅含一個開放閱讀框(open reading frame,ORF),ORF的上游及下游是5'非編碼區(qū)(5'UTR)及3'非編碼區(qū)(3'UTR)[2-3]。ORF編碼具有2 193個氨

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：793587