本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的穩(wěn)定過(guò)表達(dá)人谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基基因的WRL68細(xì)胞株構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 慢病毒載體 GCLC 過(guò)表達(dá) WRL細(xì)胞

【摘要】：目的利用慢病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)人谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基(GCLC)的WRL68細(xì)胞株。方法采用PCR方法合成GCLC基因全長(zhǎng),經(jīng)Not I、Nsi I酶切后克隆到慢病毒載體LV6上;采用PCR、酶切、測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒LV6-GCLC;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收集培養(yǎng)上清并感染W(wǎng)RL68細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞株。采用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白檢測(cè)轉(zhuǎn)染情況,采用Real-time PCR及Western blotting鑒定所構(gòu)建的細(xì)胞株;MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性;采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞谷胱甘肽(GSH)含量。結(jié)果 PCR、酶切及測(cè)序結(jié)果表明重組慢病毒載體構(gòu)建成功;重組慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后可觀察到熒光及蛋白表達(dá),包裝過(guò)表達(dá)慢病毒并檢測(cè)其濃縮滴度為1.0×109 TU/ml;用1μg/ml嘌呤霉素成功篩選出穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞株;GCLC過(guò)表達(dá)組中GCLC的m RNA和蛋白的表達(dá)量高于空載體轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組(P0.05);GCLC過(guò)表達(dá)組、空載體轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組的細(xì)胞活性間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GCLC過(guò)表達(dá)組GSH含量明顯高于空載體轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了穩(wěn)定過(guò)表達(dá)人GCLC的WRL68細(xì)胞株。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒載體 GCLC 過(guò)表達(dá) WRL細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81360420) 廣西自然科學(xué)基金(2015GXN SFAA139120;2012GXNSFAA053155)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 谷胱甘肽(GSH)作為細(xì)胞內(nèi)一種重要的調(diào)節(jié)代謝劑和抗氧化劑,具有清除氧自由基、增強(qiáng)抗氧化物酶活性、提高機(jī)體抗氧化防御能力等作用,成為多種疾病治療和輔助治療的藥物,目前已廣泛應(yīng)用于臨床[1]。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteinesynthethase,γ-GCS)是體內(nèi)合成GSH

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1 王淑艷;張愚;;慢病毒載體的設(shè)計(jì)及應(yīng)用進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2006年11期

2 黃芳;王毅剛;蔡榮;楊光華;錢(qián)程;;可誘導(dǎo)慢病毒載體的優(yōu)化策略及應(yīng)用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年06期

3 毛穎佳;鄭源強(qiáng);石艷春;;慢病毒載體及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2009年02期

4 張薇;趙志英;張坤;;慢病毒載體及應(yīng)用研究進(jìn)展[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年05期

5 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強(qiáng);王娟;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀率檢測(cè)方法的建立[J];生物工程學(xué)報(bào);2013年07期

6 徐曉明;楊慧;王曉萍;;慢病毒載體的構(gòu)建及優(yōu)化[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年09期

7 張雅麗;程通;蔡毅君;張濤;魏麗華;楊炳春;鄭舟;張軍;夏寧邵;;重組慢病毒對(duì)不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移及表達(dá)效率的研究[J];廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年03期

8 王曉通;李雷;錢(qián)倩;謝玉波;肖強(qiáng);;轉(zhuǎn)錄因子E2F-1基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

9 曹金芳;李偉宏;鄧輝;王惠寧;;核心結(jié)合因子α1過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2010年33期

10 何佳平;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄“通讀”改進(jìn)研究進(jìn)展[J];生物工程學(xué)報(bào);2011年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構(gòu)建及神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開(kāi)林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建及其包裝細(xì)胞系的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關(guān)受體α基因超表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構(gòu)建[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開(kāi)林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的病毒載體研究[A];第十三次全國(guó)臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝細(xì)胞中的表達(dá)鑒定[A];中國(guó)科協(xié)第十四屆年會(huì)第十七分會(huì)場(chǎng)環(huán)境危害與健康防護(hù)研討會(huì)論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構(gòu)建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開(kāi)林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構(gòu)建與鑒定[A];2011年全國(guó)醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇交流會(huì)暨臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進(jìn)展培訓(xùn)班論文集[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊玉芳;用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 徐世永;慢病毒載體法高效轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

3 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構(gòu)建及其功能的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2011年

4 吳福國(guó);表達(dá)Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2007年

5 馬強(qiáng);腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

6 郝又國(guó);攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對(duì)C型Niemann-Pick病小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2009年

7 楊歡;慢病毒介導(dǎo)中國(guó)人產(chǎn)甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉(zhuǎn)染肝干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2011年

8 張文卿;HCMV pp150表達(dá)及E1-pp65慢病毒載體刺激T細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究[D];山東大學(xué);2006年

9 林元邦;改進(jìn)型復(fù)制缺陷性腺病毒（HDAd）轉(zhuǎn)基因載體特異性及穩(wěn)定性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

10 梁俊;體外研究慢病毒載體介導(dǎo)人DNMT1基因?qū)LE患者CD4~+T淋巴細(xì)胞的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 熊冬蘭;白細(xì)胞介素-18基因慢病毒表達(dá)載體抗肺癌作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 許媛;TWEAK慢病毒載體的構(gòu)建及在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)與功能初步研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 鄧乃剛;p.93K-T QDPR基因慢病毒過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒載體對(duì)體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

5 魏寇準(zhǔn);肝素酶過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2014年

6 蘇一鳴;構(gòu)建過(guò)表達(dá)神經(jīng)生長(zhǎng)因子β亞基基因的慢病毒載體的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

7 高強(qiáng);慢病毒載體包裝細(xì)胞系的建立[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2006年

8 李雄;rPNCE-Lenti1259慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染人類(lèi)胚胎干細(xì)胞[D];中南大學(xué);2009年

9 劉鳳斌;慢病毒介導(dǎo)TFAM/POLG基因knock-down小鼠的建立[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

10 劉景偉;以GFP為報(bào)告基因的多基因共表達(dá)慢病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建[D];鄭州大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：788038