本文關鍵詞：抑癌蛋白UBIAD1在高爾基體定位信號的研究

  更多相關文章： UBIAD1 亞細胞定位 Golgi滯留信號 胞內(nèi)轉(zhuǎn)運 抑癌因子

【摘要】：UBIAD1蛋白與由脂代謝異常引起的施耐德角膜營養(yǎng)不良SCD（Schnyder’scorneal dystrophy），帕金森神經(jīng)疾病，多種人體癌癥以及維他命K合成有關。UBIAD1在細胞中的亞定位目前在國際上尚無定論。由于UBIAD1蛋白可作為人體膀胱癌的抑癌因子，我們研究了其在人胚腎細胞HEK293及人體膀胱癌細胞系J82和T24的亞細胞的定位。 利用生物化學與細胞生物學的方法，我們將全長UBIAD1基因、UBIAD1基因的片段、基因定點突變的UBIAD1與編碼綠色熒光蛋白的質(zhì)粒pEGFP-N1相連，轉(zhuǎn)染HEK293細胞，通過觀察綠色熒光蛋白的位置來確定其在細胞內(nèi)的定位和轉(zhuǎn)運，，體外過量表達結(jié)果與通過免疫組化得到的結(jié)果一致。我們首次觀察了UBIAD1定位在高爾基體上。通過觀察UBIAD1蛋白片段的亞細胞定位我們發(fā)現(xiàn)其N-端對其在高爾基體上的定位有重要影響，而且將UBIAD1的N-端與僅定位于細胞膜上的蛋白（orail1）相連后，可使orail1定位于高爾基體上。 生物信息學分析結(jié)果顯示UBIAD1的N-端54-57位的氨基酸序列RPWS作為高爾基體定位信號影響其在高爾基體上滯留。我們這一預測結(jié)論通過定點突變實驗得以印證，發(fā)現(xiàn)RPWS信號可以作為UBIAD1蛋白在高爾基體的滯留信號。RPWS在UBIAD1的N端可以形成一個精氨酸指（Arginine finger）結(jié)構(gòu)來幫助UBIAD1蛋白定位在高爾基體上。 用BrefeldinA處理HEK293細胞后發(fā)現(xiàn)UBIAD1蛋白在高爾基體上的定位受到破壞，因此UBIAD1很可能是通過COPII小泡從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運至高爾基體上。 為檢測RPWS突變是否影響UBIAD1的抑癌活性，將UBIAD1（RPWS突變）轉(zhuǎn)染T24細胞系，經(jīng)過流式細胞儀檢測，與正常的UBIAD1蛋白相比，突變型UBIAD1導致的細胞后期凋亡率下降，表明UBIAD1在高爾基體上的定位影響其正常功能。
【關鍵詞】：UBIAD1 亞細胞定位 Golgi滯留信號 胞內(nèi)轉(zhuǎn)運 抑癌因子
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 1 緒論9-23
• 1.1 UBIAD1 研究進展9-12
• 1.2 蛋白質(zhì)在高爾基體滯留機制12-16
• 1.3 細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分選以及膜泡運輸16-17
• 1.4 COPII 小泡的形成以及蛋白分選機制17-22
• 1.5 本論文的研究目的、意義及內(nèi)容22-23
• 2 材料和方法23-34
• 2.1 實驗材料23-26
• 2.2 實驗方法26-34
• 3 實驗結(jié)果34-52
• 3.1 UBIAD1 蛋白以及 UBIAD1 亞克隆片段的亞細胞定位研究34-39
• 3.2 UBIAD1 蛋白 N-端影響蛋白定位的特定氨基酸的確定39-43
• 3.3 UBIAD1 蛋白在細胞內(nèi)從 ER 到 Golgi 的轉(zhuǎn)運43-45
• 3.4 UBIAD1 從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的順向運輸可能依賴于 COPII 介導的轉(zhuǎn)運機制45-48
• 3.5 UBIAD1 在高爾基體上的定位一定程度上影響其腫瘤抑制活性48-52
• 4 討論52-54
• 5 總結(jié)與展望54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻56-65
• 附錄1 攻讀學位期間發(fā)表的論文65-66
• 附錄2 攻讀學位期間的會議論文66-67
• 附錄3 英文縮寫詞表67

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：786141