本文關鍵詞：心之病絡孫絡絀急的中醫(yī)微觀病理特征研究

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【摘要】：目的建立心之病絡孫絡絀急的大鼠模型，并通過研究不同觀察時間點內(nèi)大鼠整體、器官、組織、細胞以及分子水平的病理變化，以闡明“孫絡-微血管”病變之孫絡絀急的病理演變規(guī)律，為脈絡病變的臨床微觀辨證用藥提供理論依據(jù)。方法（1）選取雄性SD大鼠30只，隨機分為空白組，造模5min組、造模10min組、造模20min組以及造模30min組，每組6只。通過股靜脈注射pit的方法建立心之病絡孫絡絀急的病理模型。采用激光多普勒技術檢測造模前后心肌表面血流量變化，隨后取心肌組織行分別Naga-Olsen染色、電鏡觀察各組大鼠心肌組織病理變化，并檢測各組心肌組織claudin-5、occludin蛋白表達。另取雄性SD大鼠6只，檢測造模前后心肌微血管通透性變化。（2）選取雄性SD大鼠30只，隨機分為空白組，造模5min組、造模10min組、造模20min組以及造模30min組，每組6只。造模后檢測血漿ET-1、NO、AngⅡ、TXB2以及6-Keto-PGF1α濃度，并檢測各組心肌組織iNOS、eNOS、ET-1mRNA表達。（3）選取雄性SD大鼠30只，隨機分為空白組，造模5min組、造模10min組、造模20min組以及造模30min組每組6只，造模后采用TUNEL方法檢測各組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)，并檢測各組微血管新生、凋亡相關蛋白表達。 結果 1、與空白組比較，模型組大鼠心臟表面血流量在各時間點均有不同程度的減少（P0.05或P0.01），并且隨著時間的推移，血流量呈現(xiàn)出逐漸恢復的趨勢。Nagar-Olsen染色顯示，造模后10min開始心肌組織可見大片紅染的陽性反應區(qū)。缺血表現(xiàn)尤以模型10min組和模型20min組最為明顯。電鏡觀察顯示各模型組微血管內(nèi)皮細胞間緊密連接清晰致密，微血管內(nèi)皮細胞核不規(guī)則，染色質不均勻、邊集，，呈現(xiàn)明顯凋亡現(xiàn)象。模型各組吞飲小泡數(shù)量明顯增加。造模后10min開始微血管通透性開始增加并持續(xù)至觀察時間結束。 2、與空白組比較，各模型組血漿ET-1水平均顯著升高（P0.01），且于5min時達到高峰。血漿TXB2在造模5min組顯著升高（P0.01），而在30min組時其水平明顯下降（P0.05）。血漿6-keto-PGF1α水平在造模10min后開始顯著下降（P0.05或P0.01），并在30min時達到低峰（P0.01）。TXB2/6-keto-PGF1α在造模后5min至20min顯著增高（P0.01或P0.05），并于5min時達到高峰，而在30min時恢復至正常水平。AngⅡ水平在造模后5min內(nèi)并無顯著變化，而在造模后10min開始其水平顯著升高（P0.05），并呈遞增趨勢，于30min時達到高峰（P0.01）。各模型下血清NO濃度表現(xiàn)為不同程度的升高。基因表達方面，iNOS mRNA表達在造模后5min組、10min組顯著上調（P0.01），而在造模后30min組時其表達顯著下調（P0.01），而eNOSmRNA在各時間點表達均明顯下降（P0.05），ET-1mRNA在各組均有不同程度的升高。 3、空白組大鼠未見明顯陽性凋亡細胞，各模型組凋亡細胞數(shù)量明顯增加（P0.05），并且隨缺血時間延長，凋亡細胞數(shù)量逐漸升高。與空白組比較，Bax蛋白表達在造模后20min開始明顯升高（p0.01）。各模型組bcl-2蛋白表達無明顯變化。p53方面，與空白組比較，模型組大鼠在前20min內(nèi)無明顯變化，而在30min時顯著增強（p0.05）。與空白組比較，各模型組CD34、VEGF、PDGF、Ang2蛋白表達均未有明顯變化（p0.05）。 結論 1.孫絡絀急病變急性期，心肌表面血流量即可明顯減少。 2.孫絡絀急病變急性期，心肌表面微血管通透性顯著升高，微血管內(nèi)皮細胞緊密連接結構完整，緊密連接蛋白表達未見明顯升高，吞飲小泡數(shù)量顯著增加，提示孫絡絀急急性期微血管內(nèi)皮細胞可能通過吞飲小泡的大量釋放來使其通透性發(fā)生改變。 3.孫絡絀急病變急性期微血管內(nèi)皮細胞正常調節(jié)分泌功能紊亂，微血管舒縮因子TXA2、PGI2、ET-1、NO異常分泌、基因異常表達，動態(tài)平衡遭到破壞。孫絡絀急發(fā)生后RAS系統(tǒng)可被激活并在進一步心肌損傷過程中逐漸發(fā)揮重要作用。多種舒縮因子動態(tài)變化也提示多種復雜機制相互作用共同參與誘導著孫絡絀急發(fā)生發(fā)展過程。 4.孫絡絀急病理條件下，機體可能通過調節(jié)局部細胞凋亡相關因子的表達啟動凋亡程序，促進細胞凋亡。 5.孫絡絀急急性期觀察時間內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯微血管新生現(xiàn)象。
【關鍵詞】：心臟 絡病 孫絡絀急 微血管痙攣 病理特征
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R259
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 第一部分 心之病絡孫絡絀急模型大鼠心肌表面血流量及通透性變化研究15-26
• 1 材料與方法15-18
• 1.1 動物15
• 1.2 試劑與儀器15-16
• 1.3 動物分組與造模16
• 1.4 標本采集與指標檢測16-18
• 1.5 統(tǒng)計學處理18
• 2 結果18-22
• 2.1 心臟表面血流量變化18-19
• 2.2 心肌表面微血管通透性檢測19-20
• 2.3 Naga-Olsen 染色結果20-21
• 2.4 電鏡結果21-22
• 2.5 claudin-5 和 occludin 蛋白表達22
• 3 討論22-26
• 3.1 孫絡絀急模型的建立22-23
• 3.2 心肌表面血流量變化23-24
• 3.3 心肌表面微血管通透性變化24-26
• 第二部分 心之病絡孫絡絀急模型大鼠微血管舒縮因子變化研究26-40
• 1 材料與方法26-32
• 1.1 動物26
• 1.2 試劑與儀器26-27
• 1.3 動物分組與造模27
• 1.4 標本采集與指標檢測27-32
• 2 結果32-37
• 2.1 血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α、AngⅡ濃度變化32-34
• 2.2 血漿 NO、ET-1 濃度變化34-35
• 2.3 心肌組織 iNOS、eNOS、ET-1 mRNA 表達35-37
• 3 討論37-40
• 第三部分 心之病絡孫絡絀急模型大鼠心肌微血管新生與凋亡相關蛋白變化研究40-51
• 1 材料與方法40-43
• 1.1 動物40
• 1.2 試劑與儀器40-41
• 1.3 動物分組與造模41
• 1.4 標本采集與指標檢測41-43
• 2 結果43-48
• 2.1 TUNEL 法檢測心肌細胞凋亡指數(shù)43-44
• 2.2 微血管凋亡蛋白 Bax、Bcl-2、p53 表達44-47
• 2.3 微血管新生蛋白 CD34、VEGF、PDGF、Ang2 表達47-48
• 3 討論48-51
• 3.1 孫絡絀急病理狀態(tài)下的細胞凋亡48-49
• 3.2 孫絡絀急病理狀態(tài)下的微血管新生49-51
• 總結論51-52
• 參考文獻52-56
• 文獻綜述56-65
• 參考文獻61-65
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況65-66
• 致謝66-67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：784165