本文關(guān)鍵詞：藍(lán)氏賈第鞭毛蟲PPDK多肽抗體制備與定位研究

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【摘要】：目的制備藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(簡稱賈第蟲)磷酸烯醇式丙酮酸雙激酶(PPDK)特異性多肽抗體并進(jìn)行PPDK定位。方法采用DNAstar軟件和BIOSUN生物醫(yī)學(xué)軟件,結(jié)合抗原表位分析的基本原理,對(duì)賈第蟲PPDK的氨基酸序列進(jìn)行抗原分析,最終確定賈第蟲PPDK的優(yōu)勢抗原表位肽。將上述抗原表位肽與KLH進(jìn)行偶聯(lián),獲得3個(gè)偶聯(lián)蛋白,經(jīng)脫鹽柱吸附、洗脫純化后,對(duì)抗原表位肽-KLH偶聯(lián)蛋白進(jìn)行定量測定。將得到的3條多肽-KLH偶聯(lián)物混合,用PBS稀釋為1mg/ml,分別與第1、15、29和43d免疫4只新西蘭白兔[于頸背部皮下多點(diǎn)(至少8點(diǎn))注射多肽抗原2mg],獲得抗PPDK抗血清,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和Western blot試驗(yàn)檢測抗體的滴度和特異性。以R3為一抗,以DyLight 649抗兔IgG為二抗,采用免疫熒光法進(jìn)行PPDK的細(xì)胞定位。結(jié)果根據(jù)PPDK抗原分析結(jié)果,最終確定PPDK的優(yōu)勢抗原表位3個(gè),即p1:TPENQPANSELC(氨基酸位點(diǎn)12-23),p2:KTRYGRKTDPELC(氨基酸位點(diǎn)167-178)和p3:DLQKKLAEDMNKKHC(氨基酸位點(diǎn)641-654)。與KLH偶聯(lián)獲得3個(gè)多肽偶聯(lián)蛋白,即P1、P2和P3。3個(gè)偶聯(lián)蛋白聯(lián)合免疫新西蘭白兔獲得4份抗PPDK抗血清,純化后的抗體分別命名為R1、R2、R3和R4。Western blot檢測顯示,R3和R4可與PPDK特異性結(jié)合,無交叉反應(yīng)。以R3為一抗進(jìn)行免疫熒光試驗(yàn),結(jié)果顯示PPDK主要定位于賈第蟲細(xì)胞的胞漿內(nèi)。結(jié)論本研究獲得2個(gè)可與賈第蟲PPDK特異性結(jié)合的抗體,并初步判斷PPDK主要分布于賈第蟲細(xì)胞胞漿,為PPDK功能研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學(xué)院病原學(xué)教研室;首都醫(yī)科大學(xué)病寄生蟲學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 藍(lán)氏賈第鞭毛蟲 磷酸烯醇式丙酮酸雙激酶 多肽抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81301450) 吉林省科技廳國際合作項(xiàng)目(No.20130413035GH) 吉林省教育廳項(xiàng)目(No.2014367)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： ***藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia)簡稱賈第蟲,是引起腹瀉的主要病原體之一[1-3],賈第蟲是一種重要的模式生物,其進(jìn)化地位原始,不具備線粒體和高爾基體等典型細(xì)胞器,能量代謝缺乏三羧酸循環(huán)(tricar-boxylic acid cycle reactions)和氧化磷酸化(oxidativephosphorylation)途

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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3 盧思奇;國內(nèi)藍(lán)氏賈第鞭毛蟲研究[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào);1999年04期

4 朱勃;沈中元;曹喜濤;;微孢子蟲起源和進(jìn)化研究進(jìn)展[J];江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2007年01期

5 沈海娥;楊志宏;李冀;田喜鳳;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體細(xì)胞核的觀察[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年04期

6 閻歌，盧思奇，，王鳳蕓;從家兔分離賈第蟲并建立純培養(yǎng)[J];首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年01期

7 吳宇凡;王e

本文編號(hào)：783017