本文關(guān)鍵詞：畢赤酵母表達(dá)HBsAg的分離純化和鑒定

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【摘要】：目的：(1)建立一套以柱層析為主的畢赤酵母表達(dá)HBsAg的分離純化工藝,對(duì)HBsAg進(jìn)行生物學(xué)性質(zhì)鑒定；(2)制備重組畢赤酵母乙型肝炎疫苗,檢測(cè)重組乙型肝炎疫苗誘導(dǎo)小鼠抗體應(yīng)答。 方法：(1)畢赤酵母GS115發(fā)酵液高速離心收集菌體,加入細(xì)胞裂解液乳化高壓均質(zhì)機(jī)破碎,破碎液經(jīng)聚乙二醇沉淀法澄清樣品,上清液調(diào)整pH值,電導(dǎo)率和自身濃度,DEAE陰離子交換層析,收集合格樣品進(jìn)行苯基疏水層析,超濾濃縮脫鹽,收集濃縮液,經(jīng)過(guò)凝膠過(guò)濾分子篩層析收集純化終產(chǎn)品；(2)Western-blot免疫印跡和還原型SDS-PAGE銀染法檢測(cè)HBsAg特異性,掃描電鏡觀察HBsAg顆粒形態(tài),ELISA法檢測(cè)HBsAg含量,高效凝膠分子篩液相方法檢測(cè)HBsAg純度；(3)AlCl3溶液緩慢恒速流加NaOH溶液制備Al(OH)3佐劑,純化終產(chǎn)品稀釋至一定濃度加入等體積的鋁佐劑攪拌混勻,制備終濃度為20μg/ml(?)勺疫苗成品；(4)腹腔注射BALB/c小鼠重組乙型肝炎疫苗,誘導(dǎo)產(chǎn)生anti-HBs,眼內(nèi)眥靜脈采血,ELISA法檢測(cè)BALB/c小鼠血清中anti-HBs含量,組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：(1)Western-blot免疫印跡和SDS-PAGE銀染見(jiàn)HBsAg特異性條帶,電鏡掃描見(jiàn)均一的平均直徑為22nm球形顆粒,ELISA法檢測(cè)HBsAg含量為440μg/ml,高效凝膠分子篩液相檢測(cè)HBsAg純度超過(guò)95.0%;(2)Al(OH)3佐劑高壓滅菌后均一穩(wěn)定,未出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,自制疫苗吸附率為99.995%,達(dá)到歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn),(3)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明自制疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的anti-HBs在第7周達(dá)到峰值163±7.384U/L,與陽(yáng)性對(duì)照組有顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論：(1)成功建立了一套以柱層析為主的畢赤酵母表達(dá)的HBsAg分離純化工藝,純化終產(chǎn)品生物學(xué)性質(zhì)符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)；(2)自制乙型肝炎疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高濃度的anti-HBs,其研發(fā)工藝具有進(jìn)一步生產(chǎn)開(kāi)發(fā)前景。
【關(guān)鍵詞】：畢赤酵母 乙型肝炎表面抗原 分離純化 鑒定
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392.11
【目錄】：

• 英文縮略詞表3-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-21
• 結(jié)果21-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述：基因工程HBsAg純化技術(shù)研究進(jìn)展38-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49
• 作者簡(jiǎn)介49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：778461