本文關(guān)鍵詞：ASP-1蛋白佐劑功能區(qū)的重組表達(dá)及其免疫增效作用研究

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【摘要】：ASP-1蛋白(Activation-associated secreted protein-1,活化相關(guān)的分泌蛋白)是人體寄生蟲-盤尾絲蟲分泌的一種非毒素類蛋白。研究發(fā)現(xiàn)ASP-1與多種模式抗原共同免疫時(shí)能誘導(dǎo)Th1型偏倚的Th1/Th2型體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,具有良好的佐劑活性。但重組表達(dá)的ASP-1全長(zhǎng)蛋白存在穩(wěn)定性差且免疫原性過強(qiáng)等問題,可能影響其佐劑活性作用發(fā)揮,因此需要進(jìn)一步的研究。 研究目的：本研究擬通過分析ASP-1蛋白的結(jié)構(gòu)特征,設(shè)計(jì)佐劑活性功能區(qū)并進(jìn)行重組表達(dá),獲得免疫原性弱同時(shí)保留ASP-1佐劑活性功能區(qū)的重組蛋白；并分析其對(duì)不同類型抗原的免疫增效作用和機(jī)制。 研究方法：用生物信息學(xué)方法對(duì)ASP-1的結(jié)構(gòu)及B細(xì)胞表位進(jìn)行預(yù)測(cè)分析,設(shè)計(jì)功能區(qū)ASPPR,經(jīng)密碼子優(yōu)化后在大腸桿菌中表達(dá)。利用Ni2+親和層析純化蛋白,以濃度梯度透析方法復(fù)性；對(duì)獲得的ASPPR活性蛋白進(jìn)行穩(wěn)定性、免疫原性分析；并以蛋白(OVA、HBsAg)和多肽抗原(HIV四分支肽、HIV1-Pep5)為模式抗原進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),ELISA檢測(cè)小鼠血清抗體水平,ELISPOT檢測(cè)細(xì)胞免疫應(yīng)答情況,系統(tǒng)評(píng)價(jià)ASPPR的佐劑活性。通過以流式細(xì)胞術(shù)為基礎(chǔ)的結(jié)合試驗(yàn),及體外激活小鼠脾細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌情況探討其佐劑活性的作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：設(shè)計(jì)了保留PR-1保守結(jié)構(gòu)域的功能區(qū)ASPPR (10-153aa),其在大腸桿菌中主要以包涵體形式表達(dá),分子量為16kD,與ASP-1相比,ASPPR更容易復(fù)性,復(fù)性率是其3倍,且穩(wěn)定性更好。ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)小鼠血清中抗ASP-1抗體是抗ASPPR抗體的近30倍。體內(nèi)研究表明,ASPPR可以顯著提高蛋白和多肽類抗原的免疫原性,產(chǎn)生IgG抗體及其亞類水平和ASP-1組相似,且分泌IFN-3和IL-4的T細(xì)胞數(shù)量和ASP-1刺激組相當(dāng)。ASPPR在體外優(yōu)先結(jié)合小鼠的B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞,并刺激小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生促炎癥因子IFN-3、IL-6及調(diào)節(jié)性因子IL-10。 研究結(jié)論：本研究獲得了免疫原性弱同時(shí)保留佐劑活性的ASPPR蛋白。與ASP-1相比,ASPPR具有復(fù)性率高、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。ASPPR顯著增強(qiáng)機(jī)體產(chǎn)生Thl型偏倚的Th1/Th2型的抗體反應(yīng)和細(xì)胞免疫應(yīng)答,其佐劑活性和ASP-1相似。ASPPR通過結(jié)合并激活B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞,產(chǎn)生細(xì)胞因子(IFN-3、IL-6及IL-10)而發(fā)揮佐劑活性。并最終確定ASP-1的佐劑活性功能區(qū)位于35-153aa。 本研究為深入探索ASP-1的佐劑活性功能區(qū)及作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：ASPPR 佐劑活性功能區(qū) 佐劑活性 機(jī)制研究
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號(hào)說明10-11
• 1 緒論11-15
• 2 ASP-1佐劑活性功能區(qū)ASPPR的設(shè)計(jì)、表達(dá)及生物學(xué)特性研究15-33
• 2.1 材料與方法15-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-30
• 2.2.1 ASP-1的預(yù)測(cè)分析及ASPPR的設(shè)計(jì)20-24
• 2.2.2 ASPPR在原核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建、表達(dá)及鑒定24-28
• 2.2.3 ASPPR蛋白特性分析28-30
• 2.3 討論30-33
• 3 ASPPR對(duì)不同類型抗原的免疫增效作用及作用機(jī)制研究33-49
• 3.1 材料與方法33-37
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-43
• 3.2.1 以O(shè)VA為模式抗原的ASPPR免疫增效作用研究37
• 3.2.2 以重組蛋白HBsAg為模式抗原的ASPPR免疫增效作用研究37-39
• 3.2.3 以HIV四分支肽為模式抗原的ASPPR免疫增效作用研究39-40
• 3.2.4 以HIV1-Pep5多肽為模式抗原的ASPPR免疫增效作用研究40-42
• 3.2.5 ASPPR的作用機(jī)制研究42-43
• 3.3 討論43-49
• 4 結(jié)論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 附表1 主要儀器設(shè)備55-56
• 附錄2 主要液體試劑56-61
• 綜述61-69
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果目錄69-71
• 致謝71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱學(xué)泰,謝溱,馬瑞君;單克隆抗體制備技術(shù)研究進(jìn)展[J];甘肅科技;2005年03期

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本文編號(hào)：771668