本文關(guān)鍵詞：發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒滅活疫苗初步研究

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【摘要】：發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(SFTSV)是近年在我國新發(fā)現(xiàn)的一種布尼亞病毒,病人的主要癥狀為發(fā)熱、血小板減少、白細(xì)胞減少、消化道癥狀和多臟器功能損傷。目前已在河南、湖北、山東、江蘇、安徽、遼寧等16個(gè)省發(fā)現(xiàn)發(fā)熱伴血小板減少綜合征(SFTS)病例,病人平均死亡率在10%左右。目前尚沒有有效的疫苗可以使用,研制安全有效的預(yù)防用疫苗成為了應(yīng)對SFTS疫情的迫切需要。 根據(jù)我國SFTS疫情的分布特點(diǎn),篩選了源自7個(gè)省的7株SFTSV疫苗候選株。首先完成病毒空斑純化,Vero細(xì)胞傳代擴(kuò)增,滴度均達(dá)到108TCID50/ml以上,其中HB29株和AH12株的滴度最高,分別為108.67TCID50/ml和108.91TCID50/ml。分別接種這7株SFTSV于Vero細(xì)胞,大量擴(kuò)增后收獲的病毒液經(jīng)β-丙內(nèi)酯滅活后,采用低速離心、過濾、超濾濃縮、20%蔗糖墊層超速離心等步驟純化病毒,得到了純度和濃度均較高的病毒顆粒。首先優(yōu)化確定了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的免疫程序,然后將這七株純化后的SFTSV分別配制成含鋁佐劑的疫苗,采用相同的免疫劑量和免疫程序分別免疫兩只新西蘭大白兔,采0天、14天、28天、42天的兔血清做微量交叉中和試驗(yàn)和空斑減少交叉中和試驗(yàn),結(jié)果顯示免疫HB29株抗血清的免疫原性和交叉保護(hù)能力最好,對7株SFTSV的中和抗體幾何平均滴度為1159(空斑減少中和試驗(yàn))和538(微量中和試驗(yàn)),其次是AH12株抗血清,中和抗體平均幾何滴度為861(空斑減少中和試驗(yàn))和302(微量中和試驗(yàn))。遺傳穩(wěn)定性分析結(jié)果顯示,7株SFTSV在Vero細(xì)胞上傳代10次后核酸的同源性依然保持在100%。因此,HB29和AH12都比較適合作為疫苗生產(chǎn)用毒株。 對SFTSV滅活疫苗疫的制備條件進(jìn)行了探索。優(yōu)化確定了細(xì)胞病毒接種比例。用無血清DMEM.無血清M199、含2%胎牛血清的DMEM和含0.5%人血清白蛋白的DMEM幾種不同培養(yǎng)基,以0.01MOI的病毒量感染Vero細(xì)胞,比較了這幾種不同培養(yǎng)基中病毒的增殖動(dòng)態(tài),確定了采用無血清DMEM作為SFTSV疫苗生產(chǎn)用培養(yǎng)基。比較了p-丙內(nèi)酯和福爾馬林在不同濃度下對SFSTV的滅活情況,確定了p-丙內(nèi)酯在1：2000或1：4000的使用濃度下既可以滅活病毒,又對病毒的保護(hù)性抗原沒有損傷,為最佳的滅活條件。我們也對SFTSV的分子篩層析方法進(jìn)行了初步探索。 由于該病毒是一種全新的病毒,在疫苗研制過程中所需要建立一些新的實(shí)驗(yàn)方法。本研究建立了基于核蛋白雙抗體夾心法ELISA的SFTSV滴定方法,并與空斑滴度法和免疫熒光法進(jìn)行比較驗(yàn)證,三種方法具有較好一致性。建立了用于SFTSV疫苗毒株檢定的鑒別試驗(yàn)。采用固定血清稀釋病毒的中和試驗(yàn)方法。制備并鑒定了13株SFTSV糖蛋白單克隆抗體,建立了雙抗體夾心檢測SFTSV糖蛋白的ELISA方法。
【關(guān)鍵詞】：發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒 疫苗候選株 制備條件 檢測方法
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒滅活疫苗候選株的篩選10-41
• 1. 引言10-11
• 2.實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法13-25
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-38
• 5.討論38-39
• 6. 參考文獻(xiàn)39-40
• 7. 單元小結(jié)40-41
• 第二部分 發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒滅活疫苗制備相關(guān)條件探索41-64
• 1. 引言41-43
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料43-45
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法45-49
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-61
• 5. 討論61-62
• 6. 參考文獻(xiàn)62-63
• 7. 單元小結(jié)63-64
• 第三部分 發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒滅活疫苗研究相關(guān)檢測方法的建立64-89
• 1. 引言64-65
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料65-68
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法68-75
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果75-85
• 5. 討論85-87
• 6. 參考文獻(xiàn)87-88
• 7. 單元小結(jié)88-89
• 攻讀碩士期間已發(fā)表文章89-90
• 致謝90

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 姜曉林;王顯軍;李建東;丁淑軍;張全福;曲靖;張碩;李川;蕪為;姜梅;梁米芳;畢振強(qiáng);李德新;;家養(yǎng)動(dòng)物體表蜱中發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒分離及鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);2012年03期

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本文編號：768270