本文關(guān)鍵詞：代謝型谷氨酸受體2同源二聚體激活過程中單體選擇機制的研究

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【摘要】：代謝型谷氨酸受體（Metabotropic glutamate receptors, mGluRs）屬于C族G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein coupled receptors, GPCRs），與G蛋白相偶聯(lián)，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)第二信使系統(tǒng)如磷脂酶C（PLC）和腺苷酸環(huán)化酶（AC）而發(fā)揮作用。同C族其他受體一樣，是組成性的二聚體，但與γ-氨基丁酸受體（GABABR）和味覺受體第一家族（TIR）不同，，mGluRs為組成性同源二聚體，每個單體由捕蠅草模塊（Venus FlytrapModual，VFT）、半胱氨酸富集區(qū)（Cystein rich Region，CRD）、七次跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域（Heptahelical Domain，HD）和胞內(nèi)的C末端所組成。而同源二聚體中激活過程中的順反效應(yīng)和激活機制一直是研究的熱點，mGluRs因其穩(wěn)定二聚化和多功能域的特性而成為研究該問題的模式受體。 本文以mGluR2為研究對象，檢測了其激活過程中的順反效應(yīng)和參與單體選擇機制的結(jié)構(gòu)域。首先我們利用分子生物學(xué)方法構(gòu)建了mGluR2的人工異源二聚體以及VFT和i3loop上的功能缺失突變體，通過電穿孔轉(zhuǎn)染的方法將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中，F(xiàn)lex和IP3功能檢測的結(jié)果表明在mGluR2中只存在反式激活效應(yīng)，與之前報道的mGluR5中既有順式激活又有反式激活的結(jié)果不同。這表明在mGluR2的激活過程中具有一定的單體選擇機制�；趍GluR5和mGluR2激活方式的差異，我們又研究了CRD在單體選擇機制中的作用。將mGluR2的CRD替換成mGluR5的CRD之后，發(fā)現(xiàn)在mGluR2中可能還具有順式激活效應(yīng)，這表明CRD在單體選擇機制中確實具有重要作用，但結(jié)果尚需確認(rèn)。 總之，本文發(fā)現(xiàn)mGluR2中只具有反式激活效應(yīng)，并且可能是CRD區(qū)影響了其激活過程中對特定單體的選擇。這為該類受體中從VFTs-CRDs到HDs的激活信號傳導(dǎo)過程的研究，乃至整個C族GPCRs的激活機制的研究提供了一定的基礎(chǔ)，同時也有助于以該類受體為靶點的藥物開發(fā)。
【關(guān)鍵詞】：代謝型谷氨酸受體2 順反激活效應(yīng) 單體選擇機制 半胱氨酸富合域
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 緒論8-23
• 1.1 mGluRs 的分類和結(jié)構(gòu)8-15
• 1.2 mGluRs 在結(jié)構(gòu)上的特點15-16
• 1.3 mGluRs 的激活機制16-19
• 1.4 mGluRs 激活過程中的順反效應(yīng)19-20
• 1.5 本課題的研究目標(biāo)、內(nèi)容和意義20-23
• 2 實驗技術(shù)原理23-29
• 2.1 人胚胎腎細(xì)胞（HEK293）的培養(yǎng)23
• 2.2 瓊脂糖凝膠電泳23-24
• 2.3 點突變24
• 2.4 電穿孔轉(zhuǎn)染24-25
• 2.5 酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）25-26
• 2.6 ~3H-IP3產(chǎn)量測定法26-27
• 2.7 Ca~(2+)流檢測（Flex）27
• 2.8 FRET 檢測27-28
• 2.9 Binding assay28-29
• 3 材料與方法29-41
• 3.1 實驗材料29
• 3.2 實驗方法29-41
• 4 實驗結(jié)果與討論41-56
• 4.1 實驗結(jié)果41-54
• 4.2 討論與展望54-56
• 致謝56-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 附錄 主要符號和縮略詞表64

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張文華;王云云;丁明柳;劉劍峰;;GABA受體與脆性X染色體綜合征研究新進(jìn)展[J];生物物理學(xué)報;2013年11期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 趙亞麗;GRM7、GRM3、CMYA5基因與精神分裂癥相關(guān)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

2 曹全梁;磁靶向系統(tǒng)中磁流體動態(tài)特性和行為控制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

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4 夏晶;GABA能改善慢性嗎啡暴露貓初級視皮層功能[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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3 肖勝杰;代謝型谷氨酸受體組成性活性突變體的構(gòu)建和功能檢測[D];華中科技大學(xué);2013年

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本文編號：760938