本文關(guān)鍵詞：Smad3調(diào)控成釉細(xì)胞Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的研究

  更多相關(guān)文章： Smad Amelotin EMSA 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

【摘要】：目的:研究Smad3對(duì)Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法:用基因克隆技術(shù)獲得含有不同長度Amelotin啟動(dòng)子片段的熒光素酶報(bào)告基因載體,然后將其與Smad3瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠成釉細(xì)胞,并用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)其活性;生物學(xué)信息軟件對(duì)人和小鼠的Amelotin基因啟動(dòng)子序列的同源性進(jìn)行BLAST分析;凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)觀察Smad3和Amelotin啟動(dòng)子特異性結(jié)合位點(diǎn)之間的相互作用;基因定點(diǎn)突變構(gòu)建Smad3結(jié)合位點(diǎn)突變型Amelotin啟動(dòng)子,并用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析Smad3對(duì)野生型和突變型Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果:Smad3轉(zhuǎn)染后,Amelotin啟動(dòng)子(-160~+196)轉(zhuǎn)錄活性明顯增強(qiáng)(P0.05);將人與小鼠的Amelotin啟動(dòng)子序列(-160~+196)進(jìn)行Blast序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)兩序列在(-160~-1)具有很大的同源性;EMSA結(jié)果顯示,Smad3與Amelotin啟動(dòng)子(-160~+196)的GTCTG有相互作用;將Amelotin啟動(dòng)子上Smad3結(jié)合位點(diǎn)特征性序列"GTCTG"突變?yōu)?CCCTG"后,Smad3對(duì)突變型Amelotin基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性無顯著影響(P0.05)。結(jié)論:轉(zhuǎn)錄因子Smad3可通過與Amelotin啟動(dòng)子特定序列結(jié)合而調(diào)控Amelotin的基因表達(dá),從而在釉質(zhì)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科;濱州醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： Smad Amelotin EMSA 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170927)
【分類號(hào)】：Q78;R329.2
【正文快照】： Smad蛋白家族作為細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白,在TGF-β超家族成員的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。有研究顯示,TGF-β/Smad3信號(hào)通路可通過Smad3與Amelotin啟動(dòng)子上的Smad3結(jié)合位點(diǎn)相互作用,進(jìn)而調(diào)控成釉細(xì)胞Amelotin基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性[1]。Smad3在釉質(zhì)礦化過程中發(fā)揮著重要作用,Smad

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