Smad3調控成釉細胞Amelotin啟動子轉錄活性的研究
本文關鍵詞:Smad3調控成釉細胞Amelotin啟動子轉錄活性的研究
更多相關文章: Smad Amelotin EMSA 雙熒光素酶報告基因檢測
【摘要】:目的:研究Smad3對Amelotin啟動子轉錄活性的影響。方法:用基因克隆技術獲得含有不同長度Amelotin啟動子片段的熒光素酶報告基因載體,然后將其與Smad3瞬時轉染小鼠成釉細胞,并用雙熒光素酶報告基因檢測其活性;生物學信息軟件對人和小鼠的Amelotin基因啟動子序列的同源性進行BLAST分析;凝膠遷移實驗(EMSA)觀察Smad3和Amelotin啟動子特異性結合位點之間的相互作用;基因定點突變構建Smad3結合位點突變型Amelotin啟動子,并用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)分析Smad3對野生型和突變型Amelotin啟動子轉錄活性的影響。結果:Smad3轉染后,Amelotin啟動子(-160~+196)轉錄活性明顯增強(P0.05);將人與小鼠的Amelotin啟動子序列(-160~+196)進行Blast序列比對,發(fā)現(xiàn)兩序列在(-160~-1)具有很大的同源性;EMSA結果顯示,Smad3與Amelotin啟動子(-160~+196)的GTCTG有相互作用;將Amelotin啟動子上Smad3結合位點特征性序列"GTCTG"突變?yōu)?CCCTG"后,Smad3對突變型Amelotin基因啟動子的轉錄活性無顯著影響(P0.05)。結論:轉錄因子Smad3可通過與Amelotin啟動子特定序列結合而調控Amelotin的基因表達,從而在釉質發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。
【作者單位】: 濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院口腔科;濱州醫(yī)學院口腔醫(yī)學院;
【關鍵詞】: Smad Amelotin EMSA 雙熒光素酶報告基因檢測
【基金】:國家自然科學基金(81170927)
【分類號】:Q78;R329.2
【正文快照】: Smad蛋白家族作為細胞內的信號轉導蛋白,在TGF-β超家族成員的信號轉導中發(fā)揮重要作用。有研究顯示,TGF-β/Smad3信號通路可通過Smad3與Amelotin啟動子上的Smad3結合位點相互作用,進而調控成釉細胞Amelotin基因啟動子的轉錄活性[1]。Smad3在釉質礦化過程中發(fā)揮著重要作用,Smad
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,本文編號:750658
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