本文關鍵詞：魚藤酮建立帕金森病細胞模型的方法研究

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【摘要】：目的探討魚藤酮誘導SH-SY5Y細胞建立帕金森病(Parkinson disease,PD)細胞模型的方法。方法實驗分為空白對照組及魚藤酮0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L組共5組,各組分別于魚藤酮加入24h、48h點,觀察SH-SY5Y細胞形態(tài)變化,采用MTT比色法檢測細胞活力;于24h時采用Western blot法檢測細胞α-突觸核蛋白(α-synuclein)表達量;對空白對照組及魚藤酮0.5μmol/L、1.0μmol/L組于24h、48h行HE染色觀察細胞內包涵體形成情況。以激光共聚焦免疫熒光法觀察魚藤酮1.0μmol/L組24h時α-synuclein的分布情況。結果空白對照組細胞生長較密,神經突起細長;在魚藤酮藥物組24時,0.5μmol/L組細胞突起變短,1.0μmol/L組細胞突起短縮更明顯,2.5μmol/L組胞體腫脹明顯,5.0μmol/L組圓縮細胞增多;各濃度組48h時與24h時比較,細胞突起變短、細胞腫脹、圓縮更明顯。MTT試驗顯示1.0μmol/L魚藤酮24h組和0.5μmol/L魚藤酮48h組分別使細胞活性下降到空白對照組的(86.06±9.06)%和(62.06±7.13)%,與對照組比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Western blot結果顯示魚藤酮0.5、1.0、2.5和5.0μmol/L組SH-SY5Y細胞內α-synuclein相對表達水平分別為(1.23±0.11)、(1.41±0.20)、(1.77±0.09)和(1.31±0.28),其中1.0μmol/L、2.5μmol/L魚藤酮組α-synuclein水平高于空白對照組(P0.05);HE染色顯示,在1.0μmol/L魚藤酮24h組和0.5μmol/L魚藤酮48h組均觀察到細胞質內出現嗜伊紅、邊界清楚的類路易小體樣包涵體;免疫熒光染色顯示在1.0μmol/L魚藤酮24h組觀察到細胞內出現顆粒狀α-synuclein免疫染色陽性聚集體,可被Thioflavin S共定位。結論 1.0μmol/L魚藤酮24h誘導SH-SY5Y細胞所建立的PD模型能夠很好地模擬PD病理改變,可作為研究PD發(fā)病機制的細胞模型。
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院神經內科;華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院神經內科;
【關鍵詞】： 帕金森病 魚藤酮 凋亡 路易小體 α-突觸核蛋白
【基金】：泉州市科技局科技計劃重點項目(2014Z45) 福建省衛(wèi)生計生委青年科研課題(2014-1-67) 福建省自然科學基金青年創(chuàng)新項目(2015J05148)
【分類號】：R742.5;R-332
【正文快照】： 帕金森病(Parkinson disease,PD)是中老年人群中常見的一種神經變性疾病,其最重要的病理變化是黑質多巴胺能神經元選擇性缺失和殘存神經元中出現以α-突觸核蛋白(α-synuclein)為主要成分的路易小體和路易軸突。目前認為其發(fā)生是遺傳變異、環(huán)境暴露以及年齡等多個因素相互作用

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本文編號：745465