本文關(guān)鍵詞：魚藤酮建立帕金森病細(xì)胞模型的方法研究

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【摘要】：目的探討魚藤酮誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞建立帕金森病(Parkinson disease,PD)細(xì)胞模型的方法。方法實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組及魚藤酮0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L組共5組,各組分別于魚藤酮加入24h、48h點(diǎn),觀察SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)變化,采用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力;于24h時(shí)采用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞α-突觸核蛋白(α-synuclein)表達(dá)量;對(duì)空白對(duì)照組及魚藤酮0.5μmol/L、1.0μmol/L組于24h、48h行HE染色觀察細(xì)胞內(nèi)包涵體形成情況。以激光共聚焦免疫熒光法觀察魚藤酮1.0μmol/L組24h時(shí)α-synuclein的分布情況。結(jié)果空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)較密,神經(jīng)突起細(xì)長(zhǎng);在魚藤酮藥物組24時(shí),0.5μmol/L組細(xì)胞突起變短,1.0μmol/L組細(xì)胞突起短縮更明顯,2.5μmol/L組胞體腫脹明顯,5.0μmol/L組圓縮細(xì)胞增多;各濃度組48h時(shí)與24h時(shí)比較,細(xì)胞突起變短、細(xì)胞腫脹、圓縮更明顯。MTT試驗(yàn)顯示1.0μmol/L魚藤酮24h組和0.5μmol/L魚藤酮48h組分別使細(xì)胞活性下降到空白對(duì)照組的(86.06±9.06)%和(62.06±7.13)%,與對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示魚藤酮0.5、1.0、2.5和5.0μmol/L組SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)α-synuclein相對(duì)表達(dá)水平分別為(1.23±0.11)、(1.41±0.20)、(1.77±0.09)和(1.31±0.28),其中1.0μmol/L、2.5μmol/L魚藤酮組α-synuclein水平高于空白對(duì)照組(P0.05);HE染色顯示,在1.0μmol/L魚藤酮24h組和0.5μmol/L魚藤酮48h組均觀察到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜伊紅、邊界清楚的類路易小體樣包涵體;免疫熒光染色顯示在1.0μmol/L魚藤酮24h組觀察到細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒狀α-synuclein免疫染色陽(yáng)性聚集體,可被Thioflavin S共定位。結(jié)論 1.0μmol/L魚藤酮24h誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞所建立的PD模型能夠很好地模擬PD病理改變,可作為研究PD發(fā)病機(jī)制的細(xì)胞模型。
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 帕金森病 魚藤酮 凋亡 路易小體 α-突觸核蛋白
【基金】：泉州市科技局科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2014Z45) 福建省衛(wèi)生計(jì)生委青年科研課題(2014-1-67) 福建省自然科學(xué)基金青年創(chuàng)新項(xiàng)目(2015J05148)
【分類號(hào)】：R742.5;R-332
【正文快照】： 帕金森病(Parkinson disease,PD)是中老年人群中常見的一種神經(jīng)變性疾病,其最重要的病理變化是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元選擇性缺失和殘存神經(jīng)元中出現(xiàn)以α-突觸核蛋白(α-synuclein)為主要成分的路易小體和路易軸突。目前認(rèn)為其發(fā)生是遺傳變異、環(huán)境暴露以及年齡等多個(gè)因素相互作用

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