本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠肝臟纖維化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：⑴探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（ratbonemarrowmesenchymalstemcells,rBMSCS)體外分離純化擴(kuò)增培養(yǎng)的方法以及慢病毒載體介導(dǎo)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,eGFP)對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記的理想條件；⑵觀察移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在肝臟纖維化模型鼠肝內(nèi)的分布,遷移和分化狀況，并從病理以及血清學(xué)水平評(píng)價(jià)移植細(xì)胞對(duì)肝臟纖維化模型大鼠的治療效果，為臨床自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療肝臟疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：⑴利用密度梯度離心結(jié)合貼壁生長(zhǎng)的方法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其表面抗原進(jìn)行鑒定，，并用eGFP對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記；⑵四氯化碳腹腔注射構(gòu)建SD大鼠肝臟纖維化模型；以eGFP標(biāo)記的正常SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為細(xì)胞來(lái)源，通過(guò)尾靜脈注射將標(biāo)記的細(xì)胞移植入肝臟纖維化模型大鼠體內(nèi)，對(duì)照組注射生理鹽水。⑶細(xì)胞移植后取大鼠肝臟做組織病理學(xué)檢查：冰凍切片在熒光顯微鏡下觀察eGFP陽(yáng)性細(xì)胞在肝內(nèi)的分布狀況；石蠟切片行GFP/ALB免疫熒光雙染檢測(cè)歸巢細(xì)胞在肝內(nèi)的分化；免疫組化檢測(cè)α-SMA在肝內(nèi)的表達(dá)狀況；⑷同時(shí)采集大鼠血液，以全自動(dòng)生化分析儀和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肝功能指標(biāo)和血清纖維化指標(biāo)。 結(jié)果：⑴體外分離獲得了高純度貼壁生長(zhǎng)的大鼠BMSCs，流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果顯示細(xì)胞高表達(dá)CD44、CD90，而CD34、CD45表達(dá)陰性；并用攜帶eGFP報(bào)告基因的慢病毒成功對(duì)其進(jìn)行感染，感染率達(dá)80%以上。⑵腹腔注射CCL410周后成功構(gòu)建SD大鼠肝臟纖維化模型。⑶BMSCs移植大鼠肝臟中可檢測(cè)到eGFP陽(yáng)性的細(xì)胞，主要沿著中央靜脈及匯管區(qū)周圍纖維間隔分布，并逐漸向肝組織內(nèi)部遷移。免疫組化結(jié)果顯示eGFP陽(yáng)性細(xì)胞呈肝細(xì)胞樣細(xì)胞形態(tài)，且與肝組織相容。免疫熒光雙染法檢測(cè)到部分eGFP陽(yáng)性細(xì)胞同時(shí)表達(dá)白蛋白（ALB）。α-SMA在肝組織的表達(dá)明顯減少。⑷BMSCs移植組與模型對(duì)照組和生理鹽水組相比，肝功能和血清纖維化指標(biāo)好轉(zhuǎn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論：⑴BMSCs經(jīng)尾靜脈移植具有向纖維化肝臟歸巢的能力，定植于肝臟并且向肝細(xì)胞樣細(xì)胞分化；⑵BMSCs移植能抑制大鼠肝臟纖維化發(fā)展，部分逆轉(zhuǎn)肝臟纖維化進(jìn)程，有效改善肝臟功能。
【關(guān)鍵詞】：肝臟纖維化 骨髓細(xì)胞 間質(zhì)干細(xì)胞 干細(xì)胞移植 增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP） 治療 歸巢 分化 肝細(xì)胞樣細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575.2;R-332
【目錄】：

• 目錄4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 第一部分 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定，以及慢病毒介導(dǎo)的GFP示蹤標(biāo)記12-29
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-24
• 討論24-29
• 第二部分 SD大鼠肝臟纖維化模型的構(gòu)建以及干細(xì)胞在肝臟纖維化模型體內(nèi)的歸巢、分化以及療效分析29-53
• 材料與方法29-35
• 結(jié)果35-47
• 討論47-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59-60
• 附錄A. 英中文術(shù)語(yǔ)和縮略語(yǔ)對(duì)照表60-61
• 附錄B. 個(gè)人簡(jiǎn)歷61-62
• 附錄C. 綜述62-68
• 參考文獻(xiàn)67-68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：741578