本文關(guān)鍵詞：維生素D3抑制LPS誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的作用機(jī)制研究

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【摘要】：目的：維生素D3參與免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)，與機(jī)體固有免疫有關(guān)，維生素D3具有抗氧化作用，但其在氧化應(yīng)激中的作用機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)通過LPS誘導(dǎo)氧化應(yīng)激與DNA損傷，并觀察維生素D3對(duì)LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激與DNA損傷的保護(hù)作用，并就其機(jī)制進(jìn)行研究。方法：選用人B淋巴母細(xì)胞株，分為PBS對(duì)照組、 LPS組、LPS＋維生素D3組。采用ROS探針，用酶標(biāo)儀和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平；采用單細(xì)胞電泳彗星實(shí)驗(yàn)（COMET SOP），用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)DNA損傷；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)和共聚焦免疫熒光顯微鏡，用Annexin v-FITC方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；使用Edu增殖試劑盒和CCK8增殖試劑盒，檢測(cè)細(xì)胞增殖。用免疫熒光結(jié)合Edu增殖檢測(cè)方法觀察增值細(xì)胞中NF-kB磷酸化和NF-kB表達(dá)；6、用免疫印跡方法檢測(cè)NFkB磷酸化、NF-kB和TNF-α表達(dá)。結(jié)果：1、全波長(zhǎng)分光光度儀（酶標(biāo)儀）結(jié)果顯示， LPS組ROS的OD值（0.1914±0.149）明顯高于PBS對(duì)照組（0.0375±0.0021）（P＜0.05）,顯示LPS能夠誘導(dǎo)細(xì)胞ROS產(chǎn)生；LPS＋維生素D3組其ROS的OD值（0.1031±0.0058）明顯低于LPS組（0.1914±0.149）（P＜0.05）,顯示LPS＋維生素D3組能夠明顯的抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激；同時(shí)使用共聚焦熒光顯微鏡結(jié)果顯示：LPS刺激組熒光強(qiáng)度值（64.82±4.43）明顯高于PBS對(duì)照組（13.45±0.91）（P＜0.05）,顯示LPS能夠誘導(dǎo)細(xì)胞ROS產(chǎn)生；LPS＋維生素D3組其熒光強(qiáng)度值為：（48.24±1.46）明顯低于LPS刺激組組（64.82±4.43）（P＜0.05）,顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯的抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激；2、單細(xì)胞電泳（彗星實(shí)驗(yàn)）檢測(cè)受損細(xì)胞尾長(zhǎng)，LPS刺激組細(xì)胞尾長(zhǎng)值（943.41±96）明顯高于對(duì)PBS對(duì)照組（98.52±43）（P＜0.01）,顯示LPS能夠誘導(dǎo)細(xì)胞DNA損傷；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞尾長(zhǎng)值（286.43±52）明顯低于LPS刺激組（943.41±96）（P＜0.01）；顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯的抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞DNA損傷；3、共聚焦熒光顯微觀察細(xì)胞凋亡顯示：1ug/ml LPS刺激組細(xì)胞凋亡值（13±1.41421）與PBS對(duì)照組（9±1.41421）（P＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；10ug/ml LPS刺激組細(xì)胞凋亡值（22.5±3.53553）與1ug/ml LPS刺激組（13±1.41421）（P＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PBS對(duì)照組細(xì)胞凋亡值（9±1.41421）與10ug/ml LPS刺激組凋亡值（22.5±3.53553）（P＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡值顯示：1ug/mlLPS刺激組細(xì)胞凋亡值（30.3±6.237）與PBS對(duì)照組細(xì)胞凋亡值（20.3±2.45）（P＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；10ug/ml LPS刺激組細(xì)胞凋亡值（23.3±3.151）與1ug/ml LPS刺激組細(xì)胞凋亡值（30.3±6.237）（P＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PBS對(duì)照組細(xì)胞凋亡值（20.3±2.45）與10ug/ml LPS刺激組細(xì)胞凋亡值（23.3±3.151）（P＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4、共聚焦熒光顯微鏡觀察（Edu染色法）細(xì)胞增殖顯示：LPS刺激組細(xì)胞增殖比（79.51±10.60）明顯高于PBS對(duì)照組細(xì)胞增殖比（9.34±1.41）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞增殖比（48.68±6.34）明顯低于LPS刺激組細(xì)胞增殖比（79.51±10.60）（P＜0.05）顯示維生素D3能夠明顯抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞增殖；同時(shí)使用全波長(zhǎng)分光光度儀（酶標(biāo)儀）檢測(cè)細(xì)胞OD值，LPS刺激組細(xì)胞細(xì)胞OD值為：（6.28±4.43）明顯高于對(duì)PBS對(duì)照組（0.75±0.13）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞OD值為：（4.08±0.93）明顯低于LPS組（6.28±0.43）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞OD值為：（4.08±0.93）高于PBS對(duì)照組（0.75±0.13）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組存在細(xì)胞增殖。5、共聚焦熒光顯微鏡觀察增殖細(xì)胞在NF-kB磷酸化表達(dá)：LPS刺激組增殖細(xì)胞比為：（80.63±7.92）明顯高于對(duì)PBS對(duì)照組（9.72±1.34）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞增殖比為：（40.32±4.32）明顯低于LPS刺激組（80.63±7.92）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞增殖比為：（40.32±4.32）高于PBS對(duì)照組（9.72±1.34）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組存在細(xì)胞增殖。共聚焦熒光顯微鏡觀在察NF-kB細(xì)胞增殖比：LPS刺激組細(xì)胞增殖比為：（70.49±7.64、39）明顯高于PBS對(duì)照組（11.12±1.27）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞增殖比為：（39.11±3.72）明顯低于LPS刺激組（70.49±7.64、39）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細(xì)胞增殖比為：（39.11±3.72）高于PBS對(duì)照組（11.12±1.27）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組存在細(xì)胞增殖。6、用免疫印跡方法檢測(cè)NF-kB，NF-kB磷酸化和TNF-a表達(dá),結(jié)果顯示：LPS能明顯誘導(dǎo)NFkB表達(dá)，NF-kB磷酸化和TNF-a表達(dá)，其光密度與Actin比較，LPS刺激組NF-kB磷酸化（1.928±0.031）較PBS對(duì)照組（0.732±0.018）表達(dá)水平增高（P＜0.05）,表明LPS能誘導(dǎo)NF-kB磷酸化表達(dá)；LPS＋維生素D3刺激組NF-kB磷酸化(0.972±0.024）較LPS刺激組（1.928±0.031）表達(dá)水平減低（P＜0.05）,表明維生素D3能抑制LPS誘導(dǎo)NF-kB磷酸化表達(dá)。LPS組NF-kB光密度（1.546±0.058）較PBS對(duì)照組（0.841±0.014）表達(dá)水平增高（P＜0.05），表明LPS能誘導(dǎo)NFkB表達(dá)；LPS＋維生素D3刺激組NF-kB光密度（0.993±0.032）較LPS刺激組（1.546±0.058）表達(dá)水平減低（P＜0.05），表明維生素D3能抑制LPS能誘導(dǎo)NF-kB表達(dá)；LPS刺激組TNF-α光密度（1.176±0.041）較PBS對(duì)照組（0.891±0.027）表達(dá)水平增高（P＜0.05），表明LPS能誘導(dǎo)TNF-α表達(dá)；LPS＋維生素D3刺激組TNF-α光密度（1.004±0.039）較LPS刺激組（1.176±0.041）表達(dá)水平減低（P＜0.05），表明維生素D3能抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-a表達(dá)。結(jié)論：1.LPS能夠誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，，維生素D3能有效的抑制LPS誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞的氧化應(yīng)激。2.LPS能夠誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞的DNA損傷，維生素D3能有效的抑制LPS誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞的DNA損傷。3.LPS不能誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞的凋亡，但能誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，維生素D3能有效的抑制LPS誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞增殖。4.維生素D3能有效抑制在細(xì)胞因子NF-kB磷酸化，NF-kB表達(dá)和TNF-a表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：維生素D3 氧化應(yīng)激 脂多糖 增殖 DNA損傷
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 材料和方法17-30
• 結(jié)果30-47
• 討論47-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 英漢縮略詞對(duì)照表57-58
• 致謝58-59
• 綜述59-67
• 參考文獻(xiàn)64-67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 巴羅;劉亞峰;;IL-17及其相關(guān)因子在呼吸道炎癥疾病中的研究進(jìn)展[J];華西醫(yī)學(xué);2008年02期

2 劉清敏,劉景艷;炎癥細(xì)胞與COPD發(fā)病機(jī)制的關(guān)系[J];中原醫(yī)刊;2004年19期

本文編號(hào)：735629