本文關鍵詞：維生素D3抑制LPS誘導氧化應激的作用機制研究

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【摘要】：目的：維生素D3參與免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)，與機體固有免疫有關，維生素D3具有抗氧化作用，但其在氧化應激中的作用機制尚不明確。本實驗通過LPS誘導氧化應激與DNA損傷，并觀察維生素D3對LPS誘導的氧化應激與DNA損傷的保護作用，并就其機制進行研究。方法：選用人B淋巴母細胞株，分為PBS對照組、 LPS組、LPS＋維生素D3組。采用ROS探針，用酶標儀和激光共聚焦顯微鏡檢測細胞內(nèi)ROS水平；采用單細胞電泳彗星實驗（COMET SOP），用激光共聚焦顯微鏡檢測DNA損傷；采用流式細胞儀檢測和共聚焦免疫熒光顯微鏡，用Annexin v-FITC方法檢測細胞凋亡；使用Edu增殖試劑盒和CCK8增殖試劑盒，檢測細胞增殖。用免疫熒光結(jié)合Edu增殖檢測方法觀察增值細胞中NF-kB磷酸化和NF-kB表達；6、用免疫印跡方法檢測NFkB磷酸化、NF-kB和TNF-α表達。結(jié)果：1、全波長分光光度儀（酶標儀）結(jié)果顯示， LPS組ROS的OD值（0.1914±0.149）明顯高于PBS對照組（0.0375±0.0021）（P＜0.05）,顯示LPS能夠誘導細胞ROS產(chǎn)生；LPS＋維生素D3組其ROS的OD值（0.1031±0.0058）明顯低于LPS組（0.1914±0.149）（P＜0.05）,顯示LPS＋維生素D3組能夠明顯的抑制LPS誘導細胞產(chǎn)生氧化應激；同時使用共聚焦熒光顯微鏡結(jié)果顯示：LPS刺激組熒光強度值（64.82±4.43）明顯高于PBS對照組（13.45±0.91）（P＜0.05）,顯示LPS能夠誘導細胞ROS產(chǎn)生；LPS＋維生素D3組其熒光強度值為：（48.24±1.46）明顯低于LPS刺激組組（64.82±4.43）（P＜0.05）,顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯的抑制LPS誘導細胞產(chǎn)生氧化應激；2、單細胞電泳（彗星實驗）檢測受損細胞尾長，LPS刺激組細胞尾長值（943.41±96）明顯高于對PBS對照組（98.52±43）（P＜0.01）,顯示LPS能夠誘導細胞DNA損傷；LPS＋維生素D3刺激組細胞尾長值（286.43±52）明顯低于LPS刺激組（943.41±96）（P＜0.01）；顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯的抑制LPS誘導細胞DNA損傷；3、共聚焦熒光顯微觀察細胞凋亡顯示：1ug/ml LPS刺激組細胞凋亡值（13±1.41421）與PBS對照組（9±1.41421）（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義；10ug/ml LPS刺激組細胞凋亡值（22.5±3.53553）與1ug/ml LPS刺激組（13±1.41421）（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義；PBS對照組細胞凋亡值（9±1.41421）與10ug/ml LPS刺激組凋亡值（22.5±3.53553）（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義；流式細胞儀檢測細胞凋亡值顯示：1ug/mlLPS刺激組細胞凋亡值（30.3±6.237）與PBS對照組細胞凋亡值（20.3±2.45）（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義；10ug/ml LPS刺激組細胞凋亡值（23.3±3.151）與1ug/ml LPS刺激組細胞凋亡值（30.3±6.237）（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義；PBS對照組細胞凋亡值（20.3±2.45）與10ug/ml LPS刺激組細胞凋亡值（23.3±3.151）（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義；4、共聚焦熒光顯微鏡觀察（Edu染色法）細胞增殖顯示：LPS刺激組細胞增殖比（79.51±10.60）明顯高于PBS對照組細胞增殖比（9.34±1.41）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞增殖比（48.68±6.34）明顯低于LPS刺激組細胞增殖比（79.51±10.60）（P＜0.05）顯示維生素D3能夠明顯抑制LPS誘導細胞增殖；同時使用全波長分光光度儀（酶標儀）檢測細胞OD值，LPS刺激組細胞細胞OD值為：（6.28±4.43）明顯高于對PBS對照組（0.75±0.13）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞OD值為：（4.08±0.93）明顯低于LPS組（6.28±0.43）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯抑制LPS誘導細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞OD值為：（4.08±0.93）高于PBS對照組（0.75±0.13）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組存在細胞增殖。5、共聚焦熒光顯微鏡觀察增殖細胞在NF-kB磷酸化表達：LPS刺激組增殖細胞比為：（80.63±7.92）明顯高于對PBS對照組（9.72±1.34）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞增殖比為：（40.32±4.32）明顯低于LPS刺激組（80.63±7.92）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯抑制LPS誘導細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞增殖比為：（40.32±4.32）高于PBS對照組（9.72±1.34）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組存在細胞增殖。共聚焦熒光顯微鏡觀在察NF-kB細胞增殖比：LPS刺激組細胞增殖比為：（70.49±7.64、39）明顯高于PBS對照組（11.12±1.27）（P＜0.05）顯示LPS能夠促進細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞增殖比為：（39.11±3.72）明顯低于LPS刺激組（70.49±7.64、39）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組能夠明顯抑制LPS誘導細胞增殖；LPS＋維生素D3刺激組細胞增殖比為：（39.11±3.72）高于PBS對照組（11.12±1.27）（P＜0.05）顯示LPS＋維生素D3刺激組存在細胞增殖。6、用免疫印跡方法檢測NF-kB，NF-kB磷酸化和TNF-a表達,結(jié)果顯示：LPS能明顯誘導NFkB表達，NF-kB磷酸化和TNF-a表達，其光密度與Actin比較，LPS刺激組NF-kB磷酸化（1.928±0.031）較PBS對照組（0.732±0.018）表達水平增高（P＜0.05）,表明LPS能誘導NF-kB磷酸化表達；LPS＋維生素D3刺激組NF-kB磷酸化(0.972±0.024）較LPS刺激組（1.928±0.031）表達水平減低（P＜0.05）,表明維生素D3能抑制LPS誘導NF-kB磷酸化表達。LPS組NF-kB光密度（1.546±0.058）較PBS對照組（0.841±0.014）表達水平增高（P＜0.05），表明LPS能誘導NFkB表達；LPS＋維生素D3刺激組NF-kB光密度（0.993±0.032）較LPS刺激組（1.546±0.058）表達水平減低（P＜0.05），表明維生素D3能抑制LPS能誘導NF-kB表達；LPS刺激組TNF-α光密度（1.176±0.041）較PBS對照組（0.891±0.027）表達水平增高（P＜0.05），表明LPS能誘導TNF-α表達；LPS＋維生素D3刺激組TNF-α光密度（1.004±0.039）較LPS刺激組（1.176±0.041）表達水平減低（P＜0.05），表明維生素D3能抑制LPS誘導的TNF-a表達。結(jié)論：1.LPS能夠誘導人B淋巴母細胞發(fā)生氧化應激，，維生素D3能有效的抑制LPS誘導人B淋巴母細胞的氧化應激。2.LPS能夠誘導人B淋巴母細胞的DNA損傷，維生素D3能有效的抑制LPS誘導人B淋巴母細胞的DNA損傷。3.LPS不能誘導人B淋巴母細胞的凋亡，但能誘導細胞增殖，維生素D3能有效的抑制LPS誘導人B淋巴母細胞的細胞增殖。4.維生素D3能有效抑制在細胞因子NF-kB磷酸化，NF-kB表達和TNF-a表達。
【關鍵詞】：維生素D3 氧化應激 脂多糖 增殖 DNA損傷
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 材料和方法17-30
• 結(jié)果30-47
• 討論47-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-57
• 英漢縮略詞對照表57-58
• 致謝58-59
• 綜述59-67
• 參考文獻64-67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 巴羅;劉亞峰;;IL-17及其相關因子在呼吸道炎癥疾病中的研究進展[J];華西醫(yī)學;2008年02期

2 劉清敏,劉景艷;炎癥細胞與COPD發(fā)病機制的關系[J];中原醫(yī)刊;2004年19期

本文編號：735629