本文關(guān)鍵詞：新型疫苗佐劑胞外UTP、UDP及甘露寡糖佐劑效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： 尿苷三磷酸 尿苷二磷酸 甘露寡糖 佐劑 內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào) 嘌呤受體

【摘要】：迅猛發(fā)展的現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù),不斷開發(fā)出了諸如合成肽疫苗、基因重組亞單位疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗、核酸疫苗等的新型疫苗。新型疫苗具有抗原純度高,相對(duì)分子量小,疫苗的不良反應(yīng)低的優(yōu)勢(shì),但是我們不能否認(rèn)新型疫苗存在免疫原性低,無法激發(fā)機(jī)體有效免疫應(yīng)答的缺點(diǎn)。為了達(dá)到令人滿意的免疫刺激原性,增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)的能力,需要在疫苗中加入具有佐劑效應(yīng)的物質(zhì)。疫苗佐劑是現(xiàn)在新型疫苗研究的重要領(lǐng)域,理想疫苗佐劑應(yīng)該具備安全、有效、化學(xué)組成明確、能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫、可降解、無免疫原性等特點(diǎn)。當(dāng)前,獲準(zhǔn)用于人體的疫苗佐劑并不多,其中應(yīng)用最為廣泛的是經(jīng)典的鋁佐劑。鋁鹽佐劑能夠誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)揮顯著的免疫增強(qiáng)效應(yīng),是依靠免疫刺激作用和儲(chǔ)庫作用實(shí)現(xiàn)的,其也是唯一全球范圍內(nèi)公認(rèn)的人用疫苗佐劑。但鋁佐劑與許多重組或合成的多肽疫苗共同免疫時(shí)未能激發(fā)有效的免疫應(yīng)答,并存在不能凍干；不能誘導(dǎo)有效細(xì)胞免疫；注射部位會(huì)出現(xiàn)紅斑、結(jié)節(jié)、肉芽腫性炎癥和接觸性過敏等局部嚴(yán)重反應(yīng),使之難以滿足新型疫苗發(fā)展的需要。 我國(guó)是肝炎大國(guó),病毒性肝炎在人群中的感染率很高,對(duì)公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了嚴(yán)重危害。目前市場(chǎng)上銷售的含鋁佐劑的乙肝表面抗原重組疫苗是有效的預(yù)防疫苗,但是存在誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答不足；接種乙肝疫苗后,接種者不產(chǎn)生有效的保護(hù)性抗體；漏種率高等問題。本研究選用了兩種抗原,一種是免疫原性較弱的基因工程乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen, HBsAg),一種是免疫原性較強(qiáng)的傳統(tǒng)病毒顆粒甲肝抗原(Hepatitis A virus, HAV)。同時(shí),基于Polly Matzinger提出的危險(xiǎn)信號(hào)模式理論和當(dāng)前對(duì)嘌呤受體、甘露糖受體的研究,選用了尿苷三磷酸(Uridine triphosphate, UTP)、尿苷二磷酸(Uridine diphosphate, UDP)和甘露寡糖(Mannan oligosaccharides, MOS)三種物質(zhì)作為新型疫苗佐劑,初步探討這三種物質(zhì)對(duì)HBsAg和HAV抗原體液免疫應(yīng)答的影響。實(shí)驗(yàn)中分別用不同劑量的UTP、UDP與HAV抗原和HBsAg共同免疫ICR小鼠；不同劑量的MOS與HAV抗原共同免疫ICR小鼠。實(shí)驗(yàn)分別設(shè)空白對(duì)照(生理鹽水)組、單純HAV抗原對(duì)照組、單純HBsAg抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和UTP+鋁佐劑組、UDP+鋁佐劑組、MOS+鋁佐劑組、UTP+MOS組、UDP+MOS組各復(fù)合佐劑組。經(jīng)間接ELISA法分別檢測(cè)抗HAV IgG和抗-HBsAg IgG,得到不同時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組小鼠的抗-HAV IgG和抗HBsAg IgG效價(jià)水平。 本研究經(jīng)初步探索得出UTP、UDP和MOS三種物質(zhì)均能顯著增強(qiáng)抗-HAV IgG和抗-HBsAg IgG水平的結(jié)果。并證實(shí)了,UTP實(shí)驗(yàn)組中UTP+鋁佐劑復(fù)合佐劑組產(chǎn)生的抗-HAV IgG水平最高,對(duì)HAV的體液免疫增強(qiáng)效應(yīng)明顯優(yōu)于單純抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和單純UTP佐劑組(P0.05)；UDP實(shí)驗(yàn)組中UDP+鋁佐劑復(fù)合佐劑組產(chǎn)生的抗-HBsAg IgG水平最高,對(duì)HBsAg的體液免疫增強(qiáng)效應(yīng)明顯優(yōu)于單純抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和單純UDP佐劑組(P0.05)；MOS實(shí)驗(yàn)組中UDP、UTP分別同MOS聯(lián)合使用時(shí),均表現(xiàn)出了協(xié)同增效的作用,其增強(qiáng)HAV特異性體液免疫應(yīng)答的效果均高于單純抗原對(duì)照組、單純鋁佐劑對(duì)照組和單純使用MOS組,但差異無統(tǒng)計(jì)意義(P0.05)。在所設(shè)置的濃度梯度中,UDP、UTP的最佳劑量濃度均是2mg；MOS的最佳劑量濃度時(shí)1mg。 在佐劑的安全性試驗(yàn)中,UTP、UDP和MOS的最佳劑量組小鼠和10mg/只劑量的BALB/C小鼠的病理切片均未發(fā)現(xiàn)異常；試驗(yàn)期中小鼠未出現(xiàn)顫栗、抽搐、痙攣、呼吸困難、水腫及休克等異常反應(yīng)；進(jìn)食、排泄和精神等均未發(fā)現(xiàn)異常;注射部位無紅腫、結(jié)節(jié)。研究結(jié)果初步顯示：UTP、UDP和MOS安全性較好,在實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副反應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)UTP、UDP和MOS三種物質(zhì)均能有效增強(qiáng)特異性體液免疫應(yīng)答,同鋁佐劑復(fù)合使用還表現(xiàn)出不同的協(xié)同增效作用；單純MOS增強(qiáng)HAV抗原的特異性體液免疫應(yīng)答效果還略優(yōu)于單純鋁佐劑。這些研究為新型疫苗佐劑研究提供了新方向,今后會(huì)對(duì)此三種佐劑的細(xì)胞免疫效應(yīng)做進(jìn)一步的研究,以期為這三種物質(zhì)未來開發(fā)成為新型疫苗佐劑提供完善的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：尿苷三磷酸 尿苷二磷酸 甘露寡糖 佐劑 內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào) 嘌呤受體
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-18
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2. 實(shí)驗(yàn)操作19-22
• 2.1 間接ELISA法檢測(cè)小鼠血清抗-HBsAg IgG水平19-20
• 2.2 間接ELISA法檢測(cè)小鼠血清抗-HAV IgG水平20
• 2.3 病理切片制作20-22
• 3. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容22-52
• 第一部分 尿苷三磷酸對(duì)HAV抗原和HBsAg誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響22-31
• 一、實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析24-29
• 三、討論29-30
• 四、小結(jié)30-31
• 第二部分 尿苷二磷酸對(duì)HAV抗原和HBsAg誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響31-44
• 一、實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析33-41
• 三、討論41-43
• 四、小結(jié)43-44
• 第三部分 甘露寡糖對(duì)HAV抗原誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響44-52
• 一、實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析45-50
• 三、討論50-51
• 四、小結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 附錄56-58
• 致謝58-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59-60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬志紅;張慶波;史相國(guó);王哲彥;朱延軍;劉洪梅;;甘露寡糖對(duì)免疫低下小鼠免疫功能的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年16期

2 栗克喜;疫苗中的鋁佐劑專題討論會(huì)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);2003年01期

3 楊慧敏;肖松云;李文剛;;新型佐劑研究進(jìn)展[J];鄭州牧業(yè)工程高等�？茖W(xué)校學(xué)報(bào);2009年03期

4 王建英;楊桂文;田雪文;李云龍;;免疫佐劑及其作用機(jī)制[J];山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年01期

5 陳文斌,艾薇;甘露寡糖應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中國(guó)飼料;2004年04期

6 王妍,曹淑桂;人用疫苗佐劑的發(fā)展和應(yīng)用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2005年03期

7 葉成遠(yuǎn);寡糖飼料添加劑[J];畜禽業(yè);1999年10期

8 王芳;樂國(guó)偉;施用暉;陳征松;;甘露寡糖對(duì)小鼠肝臟中自由基的清除及抗氧化酶活性的影響[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2007年05期

9 劉懷風(fēng);張新江;張建立;郝志勇;張志勇;陳吉朝;褚娟;馬景臣;劉洪斌;趙玉良;齊順祥;汪萱怡;徐志一;;甲型肝炎減毒活疫苗與滅活疫苗不同免疫程序免疫后7年血清學(xué)效果觀察[J];中國(guó)疫苗和免疫;2009年04期

10 周力;王亮;;乙型肝炎疫苗接種無應(yīng)答因素探討[J];中國(guó)衛(wèi)生工程學(xué);2009年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 金寧一;;新型疫苗研究進(jìn)展[A];中國(guó)科協(xié)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)分會(huì)場(chǎng)特邀報(bào)告匯編[C];2001年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張智;嘌呤受體P2Y_6在固有免疫中的功能及其機(jī)制研究[D];華東師范大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 舒曉明;內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào)低分子量透明質(zhì)酸作為新型疫苗佐劑[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：728712