本文關(guān)鍵詞：武漢地區(qū)分枝桿菌菌種鑒定及分型

  更多相關(guān)文章： 分枝桿菌 菌種鑒定 ITS間隔區(qū)序列 基因分型 “北京家族“基因型

【摘要】：本研究采用分子生物學(xué)的方法對從武漢地區(qū)收集到的分枝桿菌臨床分離菌株進(jìn)行菌種鑒定并分類，通過構(gòu)建它們之間的系統(tǒng)進(jìn)化樹進(jìn)行同源性分析，為臨床上結(jié)核病的早期快速準(zhǔn)確檢測，制定合理的診斷方案，進(jìn)行有效的化療提供參考。同時(shí)，對收集到的臨床分離株中結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行基因分型，將有利于了解本地區(qū)結(jié)核分枝桿菌“北京家族”基因型的流行趨勢，進(jìn)行及時(shí)預(yù)防和監(jiān)控。 對武漢地區(qū)收集到的111株臨床抗酸染色陽性分枝桿菌采用ITS間隔區(qū)序列直接測序法進(jìn)行菌種鑒定，，并對其中鑒定為結(jié)核分枝桿菌的菌株進(jìn)行基因分型，分析武漢地區(qū)的“北京家族”基因型流行情況，結(jié)果如下： 1，菌種鑒定結(jié)果顯示：所收集到的111株抗酸染色陽性分枝桿菌臨床分離株共可分為三大復(fù)合群，即結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群、鳥胞分枝桿菌復(fù)合群和膿腫分枝桿菌。其中91株經(jīng)鑒定為慢生長菌，含54株為結(jié)核分枝桿菌MTB，占48.6%(54/111)；34株為胞內(nèi)分枝桿菌，占30.6%（34/111）；其余3株為鳥分枝桿菌，占2.7%(3/111)。另外的20株為快生長菌，為膿腫分枝桿菌，占18.1%(20/111)。 2，RD105缺失基因擴(kuò)增法基因分型結(jié)果顯示：本研究中，54例結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中，45株擴(kuò)增出786bp片段目的條帶，判定為“北京家族”基因型，占83.3%；9株擴(kuò)增出1466bp和286bp出現(xiàn)目的條帶，判定為非“北京家族”基因型，占16.7%。 綜上所述：1，ITS和生化方法相結(jié)合可將分離株準(zhǔn)確鑒定到種的水平，對臨床診斷意義重大；2，RD105方法結(jié)核分枝桿菌基因分型發(fā)現(xiàn)，“北京家族”基因型菌株在本地區(qū)呈主要流行趨勢。
【關(guān)鍵詞】：分枝桿菌 菌種鑒定 ITS間隔區(qū)序列 基因分型 “北京家族“基因型
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378.91;R440
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 前言8-22
• 1 立題背景依據(jù)8-10
• 2. 文獻(xiàn)綜述10-22
• 2.1 分枝桿菌菌種鑒定的研究進(jìn)展及現(xiàn)狀10-18
• 2.2 結(jié)核分枝桿菌基因分型技術(shù)的研究進(jìn)展18-22
• 2.2.1 插入序列 6110 限制性片段長度多態(tài)性分型（IS6110-RFLP）19-20
• 2.2.2 間隔區(qū)寡核苷酸分型技術(shù)（Spoligotyping）20
• 2.2.3 數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列基因分型技術(shù)（VNTR）20
• 2.2.4 RD105 基因分型技術(shù)20-22
• 材料與方法22-28
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 1.1 菌株來源22
• 1.2 主要試劑及耗材22
• 1.3 相關(guān)試劑配制22-23
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備23
• 1.5 實(shí)驗(yàn)所需引物合成23-24
• 2.實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 2.1 分枝桿菌生化鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)24
• 2.2 臨床分離株的分子學(xué)鑒定24-28
• 2.2.1 基因組 DNA 提取24
• 2.2.2 ITS 序列擴(kuò)增24-26
• 2.2.3 RD105 區(qū)域擴(kuò)增26-28
• 結(jié)果與分析28-37
• 1. 分枝桿菌 ITS 序列菌種鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建28-35
• 1.1 分枝桿菌 16S-23S rRNA ITS 序列擴(kuò)增結(jié)果28-29
• 1.2 分枝桿菌 16S-23S rRNA 間隔區(qū)序列同源性序列比對及進(jìn)化樹構(gòu)建29-35
• 1.2.1 鳥胞分枝桿菌 16S-23S rRNA 序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹及相似性分析32-34
• 1.2.2 結(jié)核分枝桿菌菌種 16S-23S rRNA 序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹及相似性分析34-35
• 2. 結(jié)核分枝桿菌 RD105 基因分型35-37
• 結(jié)論與討論37-39
• 1. 分枝桿菌的菌種鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建討論37
• 2. RD105 基因分型討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 致謝44-45
• 英文對照45

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：728205