本文關(guān)鍵詞：溫度對(duì)體外大鼠睪丸支持細(xì)胞增殖活力及occludin蛋白表達(dá)的影響

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【摘要】：目的觀察不同溫度對(duì)原代大鼠睪丸支持細(xì)胞增殖活力與緊密連接蛋白Occludin (OCLN)表達(dá)的影響。探討不同溫度在雄性生殖功能障礙中的作用機(jī)制。 方法體外分離青春期雄性Wistar大鼠睪丸支持細(xì)胞(Sertoli cell,SC),用兩步酶消化法獲取后培養(yǎng),進(jìn)行油紅O染色和免疫組化FasL鑒定。實(shí)驗(yàn)在(34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃)不同的溫度條件下培養(yǎng)4d后,CCK-8法檢測(cè)SC增殖活力,HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化,VWestern blot和免疫熒光法檢測(cè)OCLN表達(dá)量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果體外分離培養(yǎng)SC純度90%,免疫組化顯示FasL蛋白表達(dá)陽(yáng)性,CCK-8和HE染色結(jié)果顯示,細(xì)胞活力在36℃時(shí)增殖最強(qiáng),36℃后隨溫度增高活力逐漸減弱,細(xì)胞邊界不清、間隙變大,39℃時(shí)核裂解明顯；免疫熒光及Western Blot結(jié)果顯示：36℃時(shí)熒光呈亮綠色,高于筇℃培養(yǎng)時(shí),伴隨著溫度的增高OCLN蛋白表達(dá)量逐漸降低,差異有顯著性(P0.01)。 結(jié)論本研究結(jié)果顯示：高溫抑制SC的生長(zhǎng)并使OCLN的表達(dá)明顯減少,推測(cè)高溫破壞了支持細(xì)胞間緊密連接的完整性,影響正常的生精過(guò)程的局部環(huán)境。
【關(guān)鍵詞】：溫度 支持細(xì)胞 Occludin 血睪屏障 精子發(fā)生
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-7
• 第1章 材料和試劑7-10
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物7
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑7-8
• 1.3 主要儀器設(shè)備與工具8-10
• 第2章 實(shí)驗(yàn)方法10-15
• 2.1 原代SC細(xì)胞培養(yǎng)10-11
• 2.2 SC細(xì)胞鑒定11
• 2.2.1 油紅O染色操作步驟11
• 2.2.2 免疫組化操作步驟11
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組及培養(yǎng)11-12
• 2.4 CCK-8測(cè)細(xì)胞增值活性12
• 2.5 SC細(xì)胞HE染色12
• 2.6 檢測(cè)OCLN表達(dá)水平12-14
• 2.6.1 免疫熒光法操作步驟12-13
• 2.6.2 蛋白提取的操作步驟13
• 2.6.3 Western blotting測(cè)定13-14
• 2.7 統(tǒng)計(jì)方法14-15
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果15-19
• 3.1 SC細(xì)胞體外培養(yǎng)生長(zhǎng)特點(diǎn)15
• 3.2 SC細(xì)胞鑒定15
• 3.3 溫度對(duì)Sertoli細(xì)胞增殖活性的影響15-17
• 3.4 溫度對(duì)Sertoli細(xì)胞OCLN的表達(dá)的影響17-19
• 第4章 討論19-21
• 結(jié)論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-24
• 文獻(xiàn)綜述24-34
• 參考文獻(xiàn)29-34
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果34-35
• 致謝35-36

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 石之虎;廖曉崗;;支持細(xì)胞骨架與血睪屏障的研究進(jìn)展[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2008年02期

2 劉以訓(xùn);李喜霞;;隱睪不育的分子基礎(chǔ)[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2010年10期

3 張繼強(qiáng) ,秦達(dá)念;高溫誘導(dǎo)男性生精障礙機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)男科學(xué)雜志;2005年03期

4 陳一招,徐如祥,楊志林,徐宗俊,姜曉丹,蔡穎謙;高溫對(duì)血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的作用及其機(jī)制[J];中華創(chuàng)傷雜志;2003年09期

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本文編號(hào)：724085