本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞自我更新過(guò)程中調(diào)控性非編碼RNA的篩選及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 人胚胎干細(xì)胞 小RNA 長(zhǎng)鏈非編碼RNA 多能性 NODAL

【摘要】：【研究背景與目的】 胚胎干細(xì)胞（ESC）是分離自囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的一種多能干細(xì)胞。對(duì)于多能性的定義可以從其分化能力進(jìn)行分類，處于最頂端的是諸如受精卵等能夠分化為一個(gè)單獨(dú)個(gè)體的能力，我們常稱這種細(xì)胞為全能性干細(xì)胞；其次，具有能夠分化為多種組織細(xì)胞能力的干細(xì)胞我們稱之為多能性干細(xì)胞，而這其中ESC具有分化為任意組織細(xì)胞的能力，是所有多能性干細(xì)胞中“干性”最強(qiáng)的一種干細(xì)胞；而具有分化為特定組織的干細(xì)胞則常稱之為前體或祖細(xì)胞。我們所研究的人ESC作為一種在多能性上僅次于全能干細(xì)胞的細(xì)胞，其能夠在不喪失自身多能性的同時(shí)在體外環(huán)境下無(wú)限擴(kuò)增，以及在特定誘導(dǎo)下形成各種組織細(xì)胞的特性使其成為用于生物發(fā)育研究、藥物篩選、組織修復(fù)的最理想細(xì)胞來(lái)源。然而目前對(duì)于胚胎干細(xì)胞的多能性是通過(guò)何種機(jī)制維持的，以及基于何種機(jī)制調(diào)控其分化為各個(gè)組織細(xì)胞的具體機(jī)理尚不明確，致使其應(yīng)用受到一定程度的局限。 ESC的多能性是受到嚴(yán)格調(diào)控的。早期研究的內(nèi)容主要集中在信號(hào)通路對(duì)hESC的作用上，從中發(fā)現(xiàn)了Nodal/Activin以及BMP等信號(hào)通路對(duì)自我更新及多能性的影響。在對(duì)多種干性維持信號(hào)通路下進(jìn)行深入探索后，發(fā)現(xiàn)下游的近乎所有多能性相關(guān)基因都受到轉(zhuǎn)錄因子Oct4，Sox2和Nanog的調(diào)控，因此人們將這三個(gè)因子稱之為多能性核心轉(zhuǎn)錄因子。而在山中伸彌（Shinya Yamanaka）通過(guò)將四個(gè)多能性轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入成體細(xì)胞并使之成功轉(zhuǎn)變?yōu)镋SC樣的細(xì)胞后，更是引發(fā)了人們對(duì)于研究ESC干性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的濃厚興趣。其中非編碼RNA的相關(guān)研究在近幾年來(lái)得到相當(dāng)大的重視。 非編碼RNA（ncRNA）曾被認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)多余的成分，是RNA聚合酶II的副產(chǎn)物，并沒(méi)有什么實(shí)際的功能。而隨著技術(shù)水平的革新，目前已經(jīng)鑒定出不少具有特殊功能的非編碼RNA。對(duì)于小于200bp的RNA來(lái)說(shuō)小RNA（miRNA）的功能是被研究最多的，而目前在hESC中對(duì)于大于200bp的長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）的相關(guān)研究仍屬于起步階段，其中較為具有代表性的便是我科之前所完成的關(guān)于LincRNA-ROR的作用機(jī)制研究。對(duì)于長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）來(lái)說(shuō)，目前不少文獻(xiàn)報(bào)道了長(zhǎng)鏈非編碼的作用機(jī)制，如參與基因組表觀遺傳學(xué)印記以及染色質(zhì)組蛋白修飾，轉(zhuǎn)錄起始的活性調(diào)控，轉(zhuǎn)錄后水平RNA的調(diào)控，蛋白功能調(diào)節(jié)等多種重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控過(guò)程，可以說(shuō)是一片未被挖掘過(guò)的寶藏，值得我們進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)新的lncRNA的新作用機(jī)制，以更進(jìn)一步地理解ESC的多能性調(diào)控。 以往對(duì)于ncRNA的功能研究常只集中在一條ncRNA的某一個(gè)靶上。而隨著技術(shù)理念的不斷革新，發(fā)現(xiàn)了許多ncRNA相互之間互相調(diào)控的實(shí)例，其中內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)性RNA（ceRNA）理念的提出與發(fā)現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)增添了一個(gè)新的層面。以往對(duì)于miRNA的研究只集中在其一個(gè)靶上，但不斷有人證明發(fā)現(xiàn)單一miRNA的靶可以對(duì)應(yīng)成千上萬(wàn)個(gè)mRNA或lncRNA，而一條RNA也可能同時(shí)受到多條miRNA的調(diào)控。以此為依據(jù)所能構(gòu)建起的是一個(gè)miRNA與mRNA及l(fā)ncRNA相互作用的網(wǎng)絡(luò)，而影響其網(wǎng)絡(luò)中的任一成分均會(huì)對(duì)該網(wǎng)絡(luò)的平衡造成很大影響，出現(xiàn)表型的變化。 ESC的干性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)也同樣存在這種機(jī)制。在之前的研究中我們發(fā)現(xiàn)lincROR具有競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源mir-145的作用來(lái)提高ESC的多能性。而本課題的主要內(nèi)容就是進(jìn)一步研究挖掘ESC干性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的重要組成成分。首先從發(fā)掘新的影響ESC干性調(diào)控的miRNA入手，通過(guò)生物信息學(xué)高通量篩選以核心轉(zhuǎn)錄因子Oct4，Nanog，Sox2為靶標(biāo)中心的miRNA并驗(yàn)證其功能。然后對(duì)ESC中具有高豐度，干性喪失后迅速下調(diào)的lncRNA進(jìn)行篩選與功能鑒定，找到了一條與ESC多能性維持與自我更新密切相關(guān)的lncRNA-GAS5。最后，我們發(fā)現(xiàn)了GAS5影響ESC自我更新的方式主要是通過(guò)其轉(zhuǎn)錄后吸附大量促分化miRNA進(jìn)行的。至此構(gòu)建出一個(gè)以lncRNA-GAS5競(jìng)爭(zhēng)促分化miRNA調(diào)控hESCs多能性的內(nèi)源miRNA競(jìng)爭(zhēng)性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 第一部分：多能性因子靶向性小RNA對(duì)hESC的影響研究 方法：（1）通過(guò)檢索NCBI GEOdatabase找到與hESC分化前后miRNA表達(dá)芯片數(shù)據(jù)（GSE14473），通過(guò)芯片分析軟件高通量篩查分化中明顯上調(diào)的miRNA。（2）利用miRNA靶位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件miRanda預(yù)測(cè)66個(gè)候選miRNA與多能性因子Oct4，Nanog，Sox2的結(jié)合，從中找出miRNA進(jìn)行后續(xù)研究。（3）利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)及過(guò)表達(dá)miRNA模擬體實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證候選miRNA的功能。（4）通過(guò)構(gòu)建hESC的分化模型，研究mir-149及mir-320在分化后的表達(dá)變化，同時(shí)通過(guò)AP染色、免疫熒光檢測(cè)SSEA4實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)hESC多能性的影響。（5）利用mir-149及mir-320的模擬體及抑制劑研究其表達(dá)變化多hESC的分化趨勢(shì)的影響。 結(jié)果：（1）通過(guò)芯片分析軟件對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，同時(shí)利用聚類分析篩查出66條在8種不同hESC細(xì)胞系以及1種畸胎瘤細(xì)胞系中隨分化而發(fā)生明顯上調(diào)的miRNA。（2）構(gòu)建66條miRNA的fasta數(shù)據(jù)庫(kù)，利用miRanda靶位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件的高通量預(yù)測(cè)能力篩查與多能性因子Oct4，Nanog，Sox2的結(jié)合，發(fā)現(xiàn)其中6條具有較強(qiáng)相關(guān)性，作為候選研究對(duì)象。（3）雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)及過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)均顯示mir-149及mir-320能夠有效抑制Oct4的mRNA及蛋白表達(dá)水平。（4）通過(guò)real-time檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)mir-149及mir-320的表達(dá)隨分化程度不斷升高，與Oct4及其它多能性因子的變化呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步提示其對(duì)hESC的促分化作用。（5）在過(guò)表達(dá)mir-149及mir-320后我們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)外胚層的相關(guān)marker均發(fā)生明顯的上調(diào)，而對(duì)比Oct4干擾的結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)mir-149及mir-320的促神經(jīng)外胚層分化作用不僅是通過(guò)下調(diào)Oct4引起的，利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)及實(shí)驗(yàn)篩選，我們發(fā)現(xiàn)了另一個(gè)分化關(guān)鍵基因，β-catenin，受到mir-149及mir-320的調(diào)控。 結(jié)論：我們通過(guò)高通量的手段篩查既有芯片數(shù)據(jù)，對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行深入挖掘，同時(shí)輔以生物信息學(xué)預(yù)測(cè)手段，最終通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)研究找到并驗(yàn)證了兩條未在hESC中報(bào)道的小RNA mir-149及mir-320具有靶向多能性因子Oct4，并促進(jìn)hESC分化的作用。此外，在對(duì)mir-149及mir-320在分化中的功能進(jìn)行深入研究后發(fā)現(xiàn)，mir-149及mir-320能夠特異地抑制分化后β-catenin的表達(dá)，，促進(jìn)hESC向神經(jīng)方向分化，進(jìn)一步揭示了miRNA在hESC中作用的重要性。第二部分：LncRNA-GAS5在hESC中對(duì)多能性的影響研究 方法：（1）通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)hESC中分化前后差異表達(dá)的lncRNA。（2）構(gòu)建部分篩選出的lncRNA過(guò)表達(dá)載體，并于hESC中進(jìn)行過(guò)表達(dá)，通過(guò)real-time PCR檢測(cè)其對(duì)多能性基因的影響。（3）構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GAS5過(guò)表達(dá)及干擾的hESC細(xì)胞株，并對(duì)該細(xì)胞株進(jìn)行表型變化的鑒定。（4）對(duì)發(fā)現(xiàn)表型變化的GAS5進(jìn)行深入研究，通過(guò)cck8，流式細(xì)胞周期，AP染色檢測(cè)hESC的多能性在GAS5過(guò)表達(dá)及干擾下的變化。（5）通過(guò)原位雜交、核質(zhì)分離技術(shù)研究GAS5在hESC分化前后的細(xì)胞定位。 結(jié)果：（1）通過(guò)對(duì)高通量RNA-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，挑選出分化前后具有較大變化的lncRNA。（2）構(gòu)建DANCR、LOC100506647、LINC00458、GAS5的過(guò)表達(dá)載體，并于hESC中進(jìn)行過(guò)表達(dá)，通過(guò)real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)GAS5能夠顯著上調(diào)多能性基因Oct4，Nanog與Sox2。（3）轉(zhuǎn)染GAS5過(guò)表達(dá)慢病毒及干擾慢病毒，通過(guò)熒光顯微鏡觀察每代標(biāo)簽蛋白GFP的變化，同時(shí)通過(guò)篩選標(biāo)記Puro進(jìn)行篩選。鑒定出穩(wěn)定的hESC細(xì)胞株用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)通過(guò)觀察研究穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的表型特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)GAS5的hESCs增殖較快，細(xì)胞克隆密集；而干擾的細(xì)胞株則呈現(xiàn)出相反的狀態(tài)。（4）CCK-8、流式細(xì)胞周期檢測(cè)顯示在過(guò)表達(dá)GAS5后hESC的增殖明顯加快，同時(shí)S期的細(xì)胞明顯增多。AP染色顯示過(guò)表達(dá)GAS5后hESC克隆明顯增多，多能性增強(qiáng)，干擾后克隆數(shù)明顯減少。（5）原位雜交及核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GAS5主要聚集于胞質(zhì)中，隨hESC的分化胞質(zhì)GAS5的量發(fā)生明顯下調(diào)且與多能性成正相關(guān)。 結(jié)論：通過(guò)高通量RNA-seq的優(yōu)勢(shì)，準(zhǔn)確找出了在hESC分化前后產(chǎn)生明顯差異的lncRNA。通過(guò)挑選個(gè)別表達(dá)豐度較高的lncRNA進(jìn)行功能鑒定，成功地發(fā)現(xiàn)了GAS5具有促進(jìn)hESC自我更新及多能性的作用。而對(duì)其亞細(xì)胞水平定位的分析則揭示了GAS5胞質(zhì)中的水平與多能性因子的關(guān)系，為后續(xù)機(jī)制實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。 第三部分：GAS5通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性小RNA促進(jìn)hESC的多能性 方法：（1）通過(guò)高通量測(cè)序研究與GAS5共表達(dá)的基因，對(duì)共表達(dá)基因進(jìn)行進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析，找出與GAS5作用相關(guān)的因子或信號(hào)通路。（2）通過(guò)RNA-IP技術(shù)檢測(cè)GAS5過(guò)表達(dá)或干擾情況下NODAL的mRNA上AGO-2蛋白的結(jié)合變化。干擾Dicer酶研究GAS5的表達(dá)變化對(duì)hESC自我更新的作用。（3）利用高通量測(cè)序技術(shù)篩選與GAS5及NODAL結(jié)合的miRNA并通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證。過(guò)表達(dá)預(yù)測(cè)的候選miRNA，研究其對(duì)GAS5、NODAL以及hESC多能性的變化。（4）研究GAS5的上游，通過(guò)過(guò)表達(dá)多能性因子找到啟動(dòng)GAS5高表達(dá)的原因，通過(guò)chIP，EMSA等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，構(gòu)建完整的GAS5對(duì)hESCs多能性作用的機(jī)制網(wǎng)絡(luò)圖。 結(jié)果：（1）對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行聚類分析發(fā)現(xiàn)共表達(dá)基因中有與多能性維持相關(guān)的信號(hào)通路關(guān)鍵基因如NODAL、TGFB3，還有與增殖相關(guān)的基因CDK4。對(duì)該部分基因進(jìn)行GO功能分析發(fā)現(xiàn)與SMAD通路的激活具有高度相關(guān)性，對(duì)信號(hào)通路進(jìn)行蛋白水平檢測(cè)分析則顯示NODAL-TGFbeta-SMAD2/3該通路在GAS5過(guò)表達(dá)下受到激活起到多能性維持的重要作用。（2）干擾Dicer酶后miRNA總量發(fā)生明顯下調(diào)，在此情況下過(guò)表達(dá)或干擾GAS5對(duì)多能性因子Oct4，NANOG與Sox2的促進(jìn)作用相對(duì)弱于未干擾Dicer組。RNA-IP結(jié)果顯示GAS5過(guò)表達(dá)后NODAL的mRNA上AGO-2蛋白的結(jié)合明顯降低，干擾后明顯升高，提示GAS5能夠競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于NODAL上的AGO-2-miRNA復(fù)合體。（3）通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)篩選出與GAS5及NODAL高度相關(guān)的miRNA共56條，設(shè)立評(píng)分系統(tǒng)，挑選評(píng)分最高的10條miRNA進(jìn)行雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證靶向性。通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其作用。（4）研究GAS5的上游會(huì)否被OCT4以及SOX2結(jié)合啟動(dòng)，行chIP及過(guò)表達(dá)多能性因子等相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析和驗(yàn)證。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GAS5的促多能性促自我更新作用與NODAL的變化明顯相關(guān)，并且其影響NODAL的作用與miRNA的變化亦密切相關(guān)，此外hESC多能性的上調(diào)在miRNA總量下調(diào)后變化不明顯，提示GAS5有可能通過(guò)抑制NODAL靶向性miRNA從而上調(diào)hESC整體多能性水平，促進(jìn)hESC的多能性及自我更新。通過(guò)miRNA-seq與生物信息學(xué)技術(shù)的結(jié)合，我們找到并驗(yàn)證出了GAS5及NODAL之間共享的抑制性miRNA。隨后我們通過(guò)生物信息學(xué)分析偶然發(fā)現(xiàn)GAS5能夠被Oct4與Sox2結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，形成一條hESCs中的前饋性回路。最后我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GAS5能夠通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)抑制這些共享的抑制性miRNA提高NODAL的表達(dá)水平促進(jìn)多能性因子的表達(dá)，而多能性因子中Oct4與Sox2亦能夠反過(guò)來(lái)啟動(dòng)GAS5轉(zhuǎn)錄，形成一條前饋性回路，從而促進(jìn)hESC的自我更新及多能性。 小結(jié) 本研究通過(guò)高通量篩選，發(fā)現(xiàn)了mir-149、mir-320在hESC中隨分化程度增加而發(fā)生明顯上調(diào)，同時(shí)在未分化時(shí)其過(guò)表達(dá)能夠影響hESC的自我更新及多能性。通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)以及功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其靶向Nanog、Oct4mRNA的作用，同時(shí)在對(duì)其促分化作用進(jìn)行深入研究時(shí)發(fā)現(xiàn)mir-149及mir-320在神經(jīng)分化方向上的重要作用。本研究成功篩選并驗(yàn)證了lncRNA-GAS5能夠影響hESC的自我更新及多能性。盡管GAS5曾被多次報(bào)道在不同腫瘤及正常組織中抑制細(xì)胞的增殖，并與GR的功能抑制有關(guān)，但在ESC中我們驗(yàn)證并發(fā)現(xiàn)了其促自我更新的能力與其在胞質(zhì)中的大量聚集有關(guān)，而與GR的抑制無(wú)關(guān)。通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)輔以功能驗(yàn)證我們發(fā)現(xiàn)GAS5能夠通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)部分miRNA促進(jìn)多能性因子的表達(dá)，從而促進(jìn)表型的變化。本研究首次提出并證實(shí)了GAS5能夠通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)多能性因子靶向性miRNA，提高多能性維持關(guān)鍵通路中NODAL的表達(dá)水平，從而影響多能性基因，并最終影響hESC多能性這一調(diào)控機(jī)制，為深入理解hESC多能性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)以及內(nèi)源競(jìng)爭(zhēng)性機(jī)制作出重要貢獻(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細(xì)胞 小RNA 長(zhǎng)鏈非編碼RNA 多能性 NODAL
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-10
• Abstract10-16
• 縮略詞表16-18
• 第一部分：多能性因子靶向性小 RNA 對(duì) hESC 的影響研究18-45
• 一、前言18-19
• 二、材料與方法19-34
• 三、結(jié)果34-43
• 四、討論43-45
• 第二部分：LncRNA-GAS5 對(duì) hESC 干性維持的影響研究45-60
• 一、前言45-46
• 二、材料與方法46-52
• 三、結(jié)果52-58
• 四、討論58-60
• 第三部分：GAS5 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源 miRNA 促進(jìn) hESC 的多能性60-74
• 一、前言60-61
• 二、材料與方法61-66
• 三、結(jié)果66-72
• 四、討論72-74
• 附錄74-78
• 文獻(xiàn)綜述78-87
• 參考文獻(xiàn)87-97
• 在讀期間論文發(fā)表和科研工作情況說(shuō)明97-98
• 致謝98-99

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李紫聰;黃曉靈;劉德武;吳珍芳;;轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物反應(yīng)器研究進(jìn)展[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2013年04期

2 常勝合;徐立;李敬陽(yáng);孫威;王甲水;許桂鶯;孫佩光;吳瓊;金志強(qiáng);舒海燕;;提高香蕉胚性愈傷誘導(dǎo)成功率的可能途徑[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年19期

3 Tianzhi Huang;Angel Alvarez;Bo Hu;Shi-Yuan Cheng;;Noncoding RNAs in cancer and cancer stem cells[J];Chinese Journal of Cancer;2013年11期

4 姜英浩;張菊;盧茲凡;;干細(xì)胞倫理之爭(zhēng)的“終結(jié)者”——談諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獲得者山中伸彌[J];醫(yī)學(xué)爭(zhēng)鳴;2013年05期

5 徐麗萍;龍大宏;校對(duì);;誘導(dǎo)多能干細(xì)胞及其在神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用前景[J];解剖學(xué)研究;2013年05期

6 Jian Shu;Hongkui Deng;;Lineage Specifers:New Players in the Induction of Pluripotency[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

7 Xiao-Bing Zhang;;Cellular Reprogramming of Human Peripheral Blood Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

8 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

9 Yi-ye Zhou;Fanyi Zeng;;Integration-free Methods for Generating Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

10 Menghua Wu;Guilai Chen;Baoyang Hu;;Induced Pluripotency for Translational Research[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 梁文杰;杜惠蘭;方朝義;張鳳華;丁英鈞;;實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)與中醫(yī)學(xué)的相符性結(jié)合[A];第十一次中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2013年

2 李春竹;戚新明;任進(jìn);;miR-491-3p在MDR1介導(dǎo)的人肝癌多藥耐藥中的作用[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

3 周燦權(quán);李宇彬;;研究中的生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)第二次全國(guó)生殖臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

4 張可華;袁寶珠;;治療性干細(xì)胞產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

5 種朝陽(yáng);臧偉進(jìn);周筠;;iPSCs在心律失常疾病體外模型方面的研究進(jìn)展[A];全國(guó)第十三屆心臟學(xué)會(huì)、第十六屆心功能專業(yè)委員會(huì)和《心臟雜志》編委會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議紀(jì)要[C];2013年

6 蔡杰;李慧;楊焰;荊小莉;魏紅艷;胡春林;廖曉星;李欣;;iPS-MSCs通過(guò)調(diào)節(jié)CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T細(xì)胞改善心臟驟停后全身免疫反應(yīng)[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第十三屆組稿會(huì)暨第六屆急診醫(yī)學(xué)青年論壇論文匯編[C];2014年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蘇中靜;選擇性轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和反義RNA調(diào)控人DHRS4基因簇的轉(zhuǎn)錄[D];汕頭大學(xué);2011年

2 賈蓓;A型血友病人非整合誘導(dǎo)多能干細(xì)胞建系及其細(xì)胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 劉曉芳;誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞分化及其機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

4 申晶;骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞輸注促進(jìn)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠胰腺內(nèi)α細(xì)胞向β細(xì)胞的轉(zhuǎn)變：糖尿病治療的新模式[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

5 朱玉德;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其與膠質(zhì)瘤血管發(fā)生的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2013年

6 叢義梅;豬原始生殖細(xì)胞體內(nèi)跟蹤、體外培養(yǎng)及遺傳印記的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 陳雪梅;人胚胎干細(xì)胞傳代培養(yǎng)和神經(jīng)誘導(dǎo)分化過(guò)程中基因組遺傳變異的動(dòng)態(tài)變化[D];鄭州大學(xué);2013年

8 李遠(yuǎn);雜合型重編程Oct4聯(lián)合多能干細(xì)胞因子表現(xiàn)重編程人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

9 艾熙;非Smad通路在小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中的作用[D];華中科技大學(xué);2012年

10 靳木子;阿爾巴斯白絨山羊與綿羊胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孫廣杰;牛腺垂體傾向表達(dá)miR-7與miR-375靶基因的識(shí)別[D];吉林大學(xué);2013年

2 王振;造血系統(tǒng)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的慢病毒載體構(gòu)建及表達(dá)[D];山東師范大學(xué);2013年

3 侯歌;胃癌組織中PCNA、Ki-67、Nanog、Oct-4的表達(dá)與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

4 陳明;骨髓單個(gè)核細(xì)胞在腦缺血大鼠腦內(nèi)受損區(qū)域的定向分化[D];鄭州大學(xué);2013年

5 張艷玲;E-cadherin、β-catenin及Oct-4、Sox-2表達(dá)與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

6 費(fèi)璇;KLF4在大鼠晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)再生過(guò)程中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2013年

7 雷學(xué)華;重編程因子對(duì)小鼠組蛋白H3K4/27甲基化酶基因啟動(dòng)子活性的影響[D];安徽大學(xué);2013年

8 楊q

本文編號(hào)：716462