本文關(guān)鍵詞：大鼠miR-21慢病毒載體的構(gòu)建及其在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： miR- 慢病毒 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 大鼠

【摘要】：目的采用分子生物學(xué)方法構(gòu)建miR-21慢病毒載體,并感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),建立穩(wěn)定表達(dá)miR-21的MSCs細(xì)胞系。方法合成大鼠miR-21基因序列,進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,連接到慢病毒表達(dá)質(zhì)粒p LVX-shRNA2中。對其進(jìn)行雙酶切及基因測序鑒定,證實載體p LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p的成功構(gòu)建。對載體進(jìn)行包裝、測定病毒滴度。分4組:MSCs組不轉(zhuǎn)染病毒液,空載組轉(zhuǎn)染空載病毒液,miR-21組1用miR-21慢病毒載體以MOI 20轉(zhuǎn)染MSCs,miR-21組2用miR-21慢病毒載體以MOI 40轉(zhuǎn)染MSCs。將慢病毒顆粒以不同感染復(fù)數(shù)(MOI)感染MSCs,檢測感染效率,使用實時定量PCR法檢測MSCs中miR-21的表達(dá)。結(jié)果目的基因與慢病毒載體成功連接。病毒滴度約為6×10~8CFU/m L。載體成功感染MSCs,轉(zhuǎn)染效率達(dá)90%以上。實時定量PCR檢測結(jié)果證實miR-21組1(MOI為20)、miR-21組2(MOI為40)miR-21表達(dá)量分別為4.05±0.07、4.06±0.04,與MSCs組(1.07±0.05)及空載組(1.12±0.05)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=3 014.962,P=0.000)。結(jié)論采用分子生物學(xué)方法成功構(gòu)建了大鼠miR-21慢病毒載體系統(tǒng)p LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,并成功轉(zhuǎn)染MSCs,得到穩(wěn)定表達(dá)miR-21的MSCs細(xì)胞系,從而為進(jìn)一步研究miR-21的生物學(xué)特性提供實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【關(guān)鍵詞】： miR- 慢病毒 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81300462) 廣東省科技計劃項目(編號:2012B031800123) 廣東高校優(yōu)秀青年創(chuàng)新人才培養(yǎng)計劃項目育苗工程(編號:2012LYM_0034)
【分類號】：R373
【正文快照】： 微小RNAs(miRNAs)是存在于真核生物中的由18~25個核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼小分子RNA,其功能是參與基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控,通過與靶mRNA的堿基配對,導(dǎo)致靶mRNA的降解或翻譯抑制,從而進(jìn)行基因表達(dá)的調(diào)控[1]。研究證實miRNAs參與細(xì)胞的增殖與凋亡、器官發(fā)育、分化等重要生物學(xué)事

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王淑艷;張愚;;慢病毒載體的設(shè)計及應(yīng)用進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2006年11期

2 黃芳;王毅剛;蔡榮;楊光華;錢程;;可誘導(dǎo)慢病毒載體的優(yōu)化策略及應(yīng)用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年06期

3 毛穎佳;鄭源強(qiáng);石艷春;;慢病毒載體及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年02期

4 張薇;趙志英;張坤;;慢病毒載體及應(yīng)用研究進(jìn)展[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年05期

5 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強(qiáng);王娟;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀率檢測方法的建立[J];生物工程學(xué)報;2013年07期

6 徐曉明;楊慧;王曉萍;;慢病毒載體的構(gòu)建及優(yōu)化[J];中國臨床康復(fù);2006年09期

7 張雅麗;程通;蔡毅君;張濤;魏麗華;楊炳春;鄭舟;張軍;夏寧邵;;重組慢病毒對不同哺乳動物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移及表達(dá)效率的研究[J];廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年03期

8 王曉通;李雷;錢倩;謝玉波;肖強(qiáng);;轉(zhuǎn)錄因子E2F-1基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年02期

9 曹金芳;李偉宏;鄧輝;王惠寧;;核心結(jié)合因子α1過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2010年33期

10 何佳平;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄“通讀”改進(jìn)研究進(jìn)展[J];生物工程學(xué)報;2011年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構(gòu)建及神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建及其包裝細(xì)胞系的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關(guān)受體α基因超表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構(gòu)建[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2010年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的病毒載體研究[A];第十三次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝細(xì)胞中的表達(dá)鑒定[A];中國科協(xié)第十四屆年會第十七分會場環(huán)境危害與健康防護(hù)研討會論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構(gòu)建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構(gòu)建與鑒定[A];2011年全國醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇交流會暨臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進(jìn)展培訓(xùn)班論文集[C];2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊玉芳;用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 徐世永;慢病毒載體法高效轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

3 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構(gòu)建及其功能的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2011年

4 吳福國;表達(dá)Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構(gòu)建及其對膀胱癌細(xì)胞影響的實驗研究[D];蘭州大學(xué);2007年

5 馬強(qiáng);腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

6 郝又國;攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對C型Niemann-Pick病小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2009年

7 楊歡;慢病毒介導(dǎo)中國人產(chǎn)甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉(zhuǎn)染肝干細(xì)胞的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2011年

8 張文卿;HCMV pp150表達(dá)及E1-pp65慢病毒載體刺激T細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究[D];山東大學(xué);2006年

9 林元邦;改進(jìn)型復(fù)制缺陷性腺病毒（HDAd）轉(zhuǎn)基因載體特異性及穩(wěn)定性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

10 梁俊;體外研究慢病毒載體介導(dǎo)人DNMT1基因?qū)LE患者CD4~+T淋巴細(xì)胞的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 熊冬蘭;白細(xì)胞介素-18基因慢病毒表達(dá)載體抗肺癌作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 許媛;TWEAK慢病毒載體的構(gòu)建及在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)與功能初步研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 鄧乃剛;p.93K-T QDPR基因慢病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒載體對體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

5 魏寇準(zhǔn);肝素酶過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2014年

6 蘇一鳴;構(gòu)建過表達(dá)神經(jīng)生長因子β亞基基因的慢病毒載體的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

7 高強(qiáng);慢病毒載體包裝細(xì)胞系的建立[D];沈陽藥科大學(xué);2006年

8 李雄;rPNCE-Lenti1259慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染人類胚胎干細(xì)胞[D];中南大學(xué);2009年

9 劉鳳斌;慢病毒介導(dǎo)TFAM/POLG基因knock-down小鼠的建立[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

10 劉景偉;以GFP為報告基因的多基因共表達(dá)慢病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建[D];鄭州大學(xué);2009年

，

本文編號：715576