本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌抗原鐵調(diào)節(jié)表面決定蛋白B及疫苗研究

  更多相關(guān)文章： 金黃色葡萄球菌 鐵調(diào)節(jié)表面決定因子 原核表達(dá) 免疫保護(hù) 疫苗

【摘要】：金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱金葡菌)是在自然界中廣泛存的一種革蘭氏陽(yáng)性病原菌,它具有很強(qiáng)的致病性。金葡菌感染不同部位會(huì)引起多種不同的疾病,如皮膚軟組織感染、肺炎、乳頭炎、細(xì)菌性菌血癥等,感染嚴(yán)重者甚至可能導(dǎo)致死亡。金黃色葡萄球菌鐵調(diào)節(jié)表面決定系統(tǒng)中的一個(gè)非常重要的蛋白——鐵調(diào)節(jié)表面決定蛋白B (Iron responsive surface determinant B,簡(jiǎn)稱IsdB)是金葡菌眾多毒性致病因子之一。IsdB在金葡菌侵染宿主以及在宿主體內(nèi)繁殖的過(guò)程中均起著重要作用。同時(shí),IsdB也是一個(gè)備受關(guān)注的金葡菌疫苗研究的新型靶點(diǎn)。 本論文研究主要包括金黃色葡萄球菌天然IsdB蛋白、截短型IsdB(IsdB614、 IsdB639、IsdB645)蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)、純化、鑒定以及免疫原性和動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)等。通過(guò)對(duì)IsdBWT基因的大腸桿菌密碼子優(yōu)化,設(shè)計(jì)合成IsdBWT基因序列,構(gòu)建出pET20b-IsdBWT原核表達(dá)質(zhì)粒,將其作為表達(dá)質(zhì)粒,并以該表達(dá)質(zhì)粒為模板,通過(guò)設(shè)計(jì)截短蛋白基因序列的PCR引物,用PCR的方法獲得IsdB614、IsdB639. IsdB645蛋白的核酸序列,從而構(gòu)建出三種IsdB截短型蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒。用E. coli原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)獲得大量的IsdB614、 IsdB639以及一定量的IsdBWT和IsdB645蛋白,使用親和層析和分子篩層析結(jié)合的方法對(duì)IsdB614和IsdB639兩種蛋白進(jìn)行分離提純,利用SDS-PAGE凝膠電泳和Western Blot等鑒定手段對(duì)幾種蛋白進(jìn)行特異性檢測(cè)。用制備兔多抗的方法確定蛋白的免疫原性,建立小鼠腹腔內(nèi)感染模型,通過(guò)蛋白免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)、血清抗體滴度檢測(cè)等方法對(duì)蛋白的免疫保護(hù)效果進(jìn)行了初步的評(píng)價(jià)檢測(cè)。 通過(guò)本論文的實(shí)驗(yàn)研究,成功構(gòu)建了IsdBWT、IsdB614、IsdB639、IsdB645的原核表達(dá)質(zhì)粒,并對(duì)IsdB614和IsdB639兩個(gè)蛋白進(jìn)行了有效的分離提純。提純獲得的IsdB639蛋白表現(xiàn)出很好的免疫原性,并且在小鼠的攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)中也具有較為顯著的免疫保護(hù)效果。本論文的實(shí)驗(yàn)研究為進(jìn)一步研制有效的抑制金葡菌感染的蛋白疫苗提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 鐵調(diào)節(jié)表面決定因子 原核表達(dá) 免疫保護(hù) 疫苗
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 常見名詞縮寫10-11
• 第一章 引言11-18
• 1.1 金黃色葡萄球菌11-12
• 1.1.1 金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特征11
• 1.1.2 金黃色葡萄球菌的致病性11-12
• 1.1.3 金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)12
• 1.2 金黃色葡萄球菌鐵調(diào)節(jié)表面決定系統(tǒng)12-14
• 1.2.1 金黃色葡萄球菌鐵調(diào)節(jié)表面決定系統(tǒng)簡(jiǎn)介12-13
• 1.2.2 金黃色葡萄球菌鐵調(diào)節(jié)表面決定蛋白B簡(jiǎn)介13-14
• 1.3 金黃色葡萄球菌疫苗研究進(jìn)展14-16
• 1.4 立題目的與設(shè)計(jì)思路16-18
• 1.4.1 立題目的16-17
• 1.4.2 設(shè)計(jì)思路17-18
• 第二章 材料與方法18-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)器材18-21
• 2.1.1 主要儀器18-19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料19
• 2.1.3 常用試劑配制19-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建、篩選21-24
• 2.2.2 表達(dá)菌篩選及蛋白的表達(dá)與純化24-28
• 2.2.3 動(dòng)物免疫攻毒實(shí)驗(yàn)28-31
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-49
• 3.1 IsdBWT蛋白原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)與篩選31-33
• 3.1.1 IsdBWT原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建31-32
• 3.1.2 IsdBWT蛋白的表達(dá)與篩選32-33
• 3.1.3 小結(jié)33
• 3.2 IsdB截短型蛋白原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)菌篩選33-36
• 3.2.1 IsdB截短型蛋白原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建33-35
• 3.2.2 IsdB截短型蛋白的表達(dá)菌篩選35-36
• 3.2.3 小結(jié)36
• 3.3 IsdB614和IsdB639蛋白的大量表達(dá)與純化36-40
• 3.3.1 IsdB截短型蛋白的大量表達(dá)36-37
• 3.3.2 His Trap柱親和層析37-38
• 3.3.3 分子篩層析38-39
• 3.3.4 SDS-PAGE凝膠電泳和Western Blot鑒定39-40
• 3.3.5 小結(jié)40
• 3.4 IsdB614和IsdB639蛋白的免疫原性檢測(cè)40-41
• 3.4.1 IsdB614和IsdB639蛋白的免疫原性檢測(cè)40-41
• 3.4.2 小結(jié)41
• 3.5 IsdB639蛋白的動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)41-49
• 3.5.1 攻毒前參數(shù)的條件摸索42-43
• 3.5.2 金黃色葡萄球菌攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)43-48
• 3.5.3 小結(jié)48-49
• 討論49-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 附錄58-65
• 作者簡(jiǎn)介65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 吳小林;;治療葡萄球菌感染的藥物[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));2006年06期

2 張強(qiáng),周繇;金黃色葡萄球菌的液體培養(yǎng)[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1996年S1期

3 閆懷士;李京培;;艾灸抗小鼠流感病毒性肺炎的實(shí)驗(yàn)研究[J];上海針灸雜志;2006年07期

4 李冬野;崔玉東;侯喜林;朱戰(zhàn)波;樸范澤;;金黃色葡萄球菌β-溶血素的原核表達(dá)及其溶血活性檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2007年02期

5 劉秀梅;食源性疾病監(jiān)控技術(shù)的研究[J];中國(guó)食品衛(wèi)生雜志;2004年01期

6 李毅;金黃色葡萄球菌及其腸毒素研究進(jìn)展[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2004年04期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 崔莉;金黃色葡萄球菌IsdB蛋白的表達(dá)與免疫原性研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2008年

2 張艷晶;金黃色葡萄球菌FnBA亞單位疫苗及核酸疫苗實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2009年

3 魏志恒;金黃色葡萄球菌及其溶血素基因分布研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 佟丹丹;金黃色葡萄球菌IsdB免疫優(yōu)勢(shì)片段單抗制備及抗原表位初步分析[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：707345