本文關(guān)鍵詞：藥物性脊髓損傷動物模型制作探索及其脊髓內(nèi)NSE、AchE、NFP和S-100的表達(dá)研究

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【摘要】：背景和目的 兒童神經(jīng)源性膀胱主要由于先天性神經(jīng)管發(fā)育畸形后行手術(shù)治療后神經(jīng)損傷所致。另外,由于神經(jīng)系統(tǒng)再生能力較差,在治療方面是醫(yī)學(xué)上面臨的巨大難題。神經(jīng)源性膀胱傳統(tǒng)的治療效果較差,以及不能逆轉(zhuǎn)神經(jīng)元損傷這一發(fā)病機理。目前脊髓損傷動物模型較多,但是均存在諸多弊端。因而,神經(jīng)源性膀胱的治療研究缺少動物模型。同時,由于神經(jīng)源性膀胱的治療研究不能僅僅依靠臨床探索性治療。因此,合適的神經(jīng)源性膀胱相關(guān)動物模型較為重要。由于小兒神經(jīng)源性膀胱主要由于神經(jīng)管畸形行手術(shù)治療所致,因此,我們需要尋找合理的脊髓損傷動物模型,從而得到神經(jīng)源性膀胱動物模型。根據(jù)研究報道維甲酸、環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、丙戊酸鈉均有致小鼠、大鼠脊髓損傷的作用。但是,小鼠、大鼠均不利于神經(jīng)源性膀胱的進(jìn)一步治療研究,所以,尋求一種利于神經(jīng)源性膀胱治療研究的動物模型成為當(dāng)務(wù)之急。近年來干細(xì)胞移植的研究給這一醫(yī)學(xué)難題帶來了一定的希望。根據(jù)相關(guān)報道脊髓中神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、乙酰膽堿酯酶(AchE)、及神經(jīng)絲蛋白(NFP)及S-100蛋白的表達(dá)情況與脊髓損傷后神經(jīng)源性膀胱的形成有一定的關(guān)系,我們可以通過脊髓內(nèi)以上指標(biāo)判斷脊髓損傷情況。 我們通過探索藥物性脊髓損傷與動物神經(jīng)源性膀胱的關(guān)系,尋求最接近兒童發(fā)病機理的脊髓損傷動物模型,從而找出合理的神經(jīng)源性膀胱動物模型制作方法。通過檢測動物模型脊髓中AchE、s-100、NSE、NFP的表達(dá)情況,了解它們與脊髓損傷的關(guān)系,進(jìn)而了解藥物性脊髓損傷導(dǎo)致神經(jīng)源性膀胱形成的關(guān)系。 對象和方法 我們采用SD大鼠進(jìn)行預(yù)實驗,選取新西蘭孕兔為實驗動物。 SD大鼠動物模型制作：選擇剛確定懷孕的SD大鼠35只隨機分為環(huán)磷酰胺組、甲氨蝶呤組、維甲酸組、丙戊酸鈉組及對照組。各實驗組按照配制完成的試劑于大鼠懷孕后第九天起每天16：00給予相應(yīng)藥物。正常對照組給予等劑量的生理鹽水注射液。 新西蘭孕兔動物模型制作：選擇確定懷孕的新西蘭兔隨機分為環(huán)磷酰胺組、丙戊酸鈉組、甲氨蝶呤組、維甲酸組及對照組。各實驗組按照配制完成的試劑于懷孕后第五天起每天16：00給予相應(yīng)藥物。正常對照組給予等劑量的生理鹽水注射液。 免疫組織化學(xué)觀察胎兔脊髓：正常分娩后檢查胎兔存活情況,檢查胚胎外觀,判定是否有外觀可見畸形并記錄結(jié)果。流產(chǎn)孕兔給予及時記錄流產(chǎn)時間,收集流產(chǎn)胎兔,檢查外觀是否有可見畸形。另外,對于中途流產(chǎn)孕兔給予解剖,暫時給予冰凍,待標(biāo)本收集完整后統(tǒng)一取出脊髓行HE染色及免疫組化檢測。存活仔兔給予繼續(xù)喂養(yǎng),死亡仔兔取脊髓固定,石蠟包埋切片進(jìn)一步進(jìn)行免疫組織化學(xué)觀察脊髓中乙酰膽堿酯酶(AchE)、S-100蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)及神經(jīng)絲蛋白(NFP)的水平。 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成數(shù)據(jù)處理。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,進(jìn)行Kolmogorov-Smirnov正態(tài)性檢驗,數(shù)據(jù)屬正態(tài)分布的,多組間比較采用方差(ANOVA)分析和Bonferroni posthoc分析,組內(nèi)比較采用t檢驗；數(shù)據(jù)屬非正態(tài)分布的,用秩和檢驗(H檢驗)。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 實驗結(jié)果 SD大鼠動物模型：各實驗組均有出現(xiàn)仔鼠腰骶部皮膚缺損。環(huán)磷酰胺組及甲氨蝶呤組均有孕鼠流產(chǎn),流產(chǎn)率分別為39.13%及16.67%,流產(chǎn)仔鼠腰骶部外觀未見皮膚缺損。實驗組中,環(huán)磷酰胺和維甲酸組的致畸率相對較高,分別為13.04%及14.81%。各實驗組中環(huán)磷酰胺組,甲氨蝶呤組仔鼠的死亡率較高分別為60.87%及54.17%。對照組未出現(xiàn)大鼠流產(chǎn),所產(chǎn)仔鼠均未見腰骶部皮膚缺損。我們對所有大鼠解剖后均可見實驗組仔鼠出現(xiàn)脊髓完整性較差。 新西蘭孕兔動物模型：環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、維甲酸組均有出現(xiàn)仔鼠腰骶部皮膚缺損。環(huán)磷酰胺組共產(chǎn)仔兔21只,死亡率76.19%,致畸率9.52%；甲氨蝶呤組共有產(chǎn)仔兔19只,死亡率57.89%,致畸率10.53%；丙戌酸鈉組共產(chǎn)仔兔21只,死亡率47.62%,致畸率為0。維甲酸組共產(chǎn)仔兔24只,死亡率45.83%,致畸率12.5%。生理鹽水對照組胎鼠全部存活,均未見明顯腰骶部皮膚缺損。 免疫組化顯示：胎兔脊髓中乙酰膽堿酯酶(AchE)、s-100蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、抗神經(jīng)絲蛋白(NFP)的陽性區(qū)平均灰度積分光密度值(G)與生理鹽水作為對照組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。我們發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿酯酶、神經(jīng)元特異性烯醇化酶的G較對照組降低.(p0.5),有統(tǒng)計學(xué)意義；而s-100蛋白及神經(jīng)絲蛋白則升高(p0.5),有統(tǒng)計學(xué)意義。環(huán)磷酰胺組、丙戊酸鈉組、甲氨蝶呤組及維甲酸組各組間采用方差(?)ANOVA)分析無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 實驗結(jié)論 1、環(huán)磷酰胺、丙戊酸鈉、甲氨蝶呤及全反式維甲酸在大鼠脊髓損傷動物模型中,對大鼠脊髓有抑制作用。其中環(huán)磷酰胺、全反式維甲酸對大鼠脊髓抑制作用較丙戊酸鈉及甲氨蝶呤相對較明顯,但流產(chǎn)率較高,致畸率較低。 2、環(huán)磷酰胺、丙戊酸鈉、甲氨蝶呤及全反式維甲酸對新西蘭兔脊髓均有一定的程度的損傷,但是均未見外觀畸形。新西蘭孕兔流產(chǎn)率較高,仔兔死亡率相對較高,致畸率較低。其中四組中環(huán)磷酰胺、全反式維甲酸對新西蘭兔較甲氨蝶呤及丙戊酸鈉具有更好的脊髓損傷作用。 3、實驗組新西蘭仔兔脊髓內(nèi)乙酰膽堿酯酶、s-100蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶、神經(jīng)絲蛋白與正常組相比均有一定的變化。動物模型中AchE和NSE有一定程度的降低,而s-100蛋白及神經(jīng)絲蛋白有一定程度的升高,與脊髓損傷存在一定關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：脊髓損傷 動物模型 神經(jīng)元特異性烯醇化酶 乙酰膽堿酯酶 神經(jīng)絲蛋白 S-100蛋白
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R651.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 中英文~.寫詞表13-14
• 前言14-16
• 第一部分 SD大鼠、兔脊髓損傷動物模型的建立探索16-26
• 1 實驗材料16-18
• 2 動物預(yù)實驗18-20
• 3 動物實驗20-23
• 4 討論23-26
• 第二部分 胎兔脊髓中乙酰膽堿酯酶、S-100蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶及神經(jīng)絲蛋白免疫組織化學(xué)檢測26-35
• 1 實驗材料26-27
• 2 實驗方法27-29
• 3 實驗結(jié)果29-32
• 4 討論32-35
• 結(jié)論及展望35-36
• 1 結(jié)論35
• 2 展望35-36
• 附圖36-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 綜述48-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 作者簡歷62
• 在讀碩士研究生期間發(fā)表的論文62
• 基金支持62-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：705162