本文關(guān)鍵詞：蟲卵ITS-2基因序列鑒別華支睪吸蟲與扇棘單睪吸蟲研究及應(yīng)用

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【摘要】：目的建立以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)的華支睪吸蟲與扇棘單睪吸蟲的鑒別診斷方法，評(píng)估華支睪吸蟲流行區(qū)內(nèi)扇棘單睪吸蟲感染的比重。 方法在華支睪吸蟲流行區(qū)采集華支睪吸蟲和扇棘單睪吸蟲成蟲，從成蟲蟲體中直接分離兩種蟲卵，收集、保存作為實(shí)驗(yàn)樣本，提取兩種吸蟲蟲卵的基因組DNA，PCR擴(kuò)增ITS-2序列，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳并根據(jù)條帶大小判斷蟲種，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化、測(cè)序，將測(cè)序得到的核酸序列經(jīng)DNAStar軟件整理分析并與NCBI GenBank已登錄的序列比對(duì)做同源性分析，以確保結(jié)果正確；再將兩種吸蟲卵按蟲卵數(shù)目不同分組實(shí)驗(yàn)以及與蛔蟲、鞭蟲、鉤蟲、蟯蟲四種常見腸道線蟲做交叉實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)方法效度；最后以扶綏縣現(xiàn)場(chǎng)糞檢診斷為華支睪吸蟲感染者的糞便為實(shí)驗(yàn)材料，將水洗沉淀后獲得的蟲卵及糞渣的混合物重復(fù)前述實(shí)驗(yàn)步驟，根據(jù)對(duì)PCR產(chǎn)物電泳后的條帶有無及條帶位置，推斷糞檢結(jié)果為“華支睪吸蟲感染者”感染的吸蟲蟲種，，分析評(píng)估華支睪吸蟲流行區(qū)內(nèi)扇棘單睪吸蟲感染者的比重。 結(jié)果分別對(duì)以華支睪吸蟲卵及扇棘單睪吸蟲卵基因組DNA為模板的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后，觀察電泳圖譜可以見到在400bp、500bp左右處各顯示一條明顯條帶，在以兩種蟲卵DNA混合液為模板的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖譜中，可見在400bp和500bp左右處各有一條明顯條帶，將測(cè)序得到的核酸序列進(jìn)行Blast比對(duì)后，顯示與NCBI GenBank中的相應(yīng)序列高度同源；按蟲卵數(shù)不同進(jìn)行的分組實(shí)驗(yàn)中，電泳結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組中不同蟲卵數(shù)的華支睪吸蟲樣本均可在400bp左右處見到一條明顯條帶，扇棘單睪吸蟲樣本大部分可在500bp處見到明顯條帶；混入四種腸道線蟲卵的試驗(yàn)樣本，單獨(dú)以任一種線蟲卵DNA為模板進(jìn)行的PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后的電泳圖譜均不見任何明顯條帶，而以混入了兩種吸蟲卵DNA為模板進(jìn)行的PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳后的電泳圖譜則在相應(yīng)位置出現(xiàn)明顯條帶；以加藤法檢測(cè)吸蟲蟲卵陽性的糞便樣本為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行蟲種鑒定中，蟲卵陽性樣本的檢出率為95.93%，其中華支睪吸蟲感染者82人，占49.70%，扇棘單睪吸蟲感染者76人，占46.06%，混合感染者7人，占4.24%。沒檢出的占4.07%。 結(jié)論1.本方法可對(duì)糞便中華支睪吸蟲卵和扇棘單睪吸蟲卵進(jìn)行有效鑒別，檢驗(yàn)效度較高，可以作為兩蟲種的鑒別檢測(cè)方法。2.扶綏縣現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查診斷為華支睪吸蟲感染者近一半為誤診，該縣人群華支睪吸蟲感染率調(diào)查評(píng)估存在較大偏差。
【關(guān)鍵詞】：華支睪吸蟲 扇棘單睪吸蟲 ITS-2
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R383.2;R3416
【目錄】：

• 中英文縮略語表4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 第一部分 PCR 技術(shù)鑒別華支睪吸蟲與扇棘單睪吸蟲方法的建立13-26
• 1. 材料與方法13-19
• 2. 結(jié)果19-23
• 3. 討論23-26
• 第二部分 PCR 技術(shù)鑒別華支睪吸蟲與扇棘單睪吸蟲方法的應(yīng)用26-34
• 1. 材料與方法26-29
• 2. 結(jié)果29-32
• 3. 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 附錄39-47
• 綜述47-62
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 論文鳴謝62-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：697892