本文關鍵詞：一種1型單純皰疹病毒載體系統(tǒng)的建立

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【摘要】：1型單純皰疹病毒(HSV-1)作為溶瘤病毒和病毒載體的研究已有很長的歷史.本研究利用細菌人工染色體技術建立了一種HSV-1載體系統(tǒng).首先,將HSV-1內部反向重復序列(internal inverted repeat sequences,IR)兩側的片段克隆入p KO5獲得穿梭質粒p KO5/BN,其電轉含p HSVBAC的大腸桿菌后篩選獲得刪除IR區(qū)重組DNA的p HSVΔIR-BAC.p HSVΔIR-BAC轉染Vero細胞獲得刪除IR區(qū)的重組病毒HSVΔIR(MH1001).上述p KO5/BN和含p HSVΔIR-BAC的大腸桿菌構成了HSV-1載體系統(tǒng).利用該系統(tǒng)獲得了表達綠色熒光蛋白EGFP的重組病毒HSVΔIR/EGFP(MH1002).MH1001和MH1002在感染的Vero細胞中增殖水平略低于野生型HSV-1,但無顯著差異;Western印跡檢測表明,重組病毒早期蛋白質ICP0、ICP4、ICP8、ICP22、ICP27在感染細胞中的表達水平下降;免疫熒光及激光共聚焦檢測表明,重組病毒與野生型病毒均存在于細胞質中.以上結果表明,刪除IR區(qū)的重組HSV-1保留了復制能力,能夠攜載并表達外源基因,建立的HSV-1載體系統(tǒng)可用于構建攜載外源基因的復制型重組HSV-1.
【作者單位】： 新疆大學生命科學與技術學院;
【關鍵詞】： 型單純皰疹病毒 病毒載體 細菌人工染色體 內部反向重復序列
【基金】：新疆維吾爾自治區(qū)高技術研究發(fā)展項目(No.2010016)~~
【分類號】：R373.11
【正文快照】： 1型單純皰疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)為嗜神經性病毒,在人群中感染非常普遍,臨床表現(xiàn)為黏膜或皮膚局部集聚皰疹等輕微癥狀.HSV-1為雙鏈DNA病毒,基因組152 kb,由獨特長片段(unique long,UL)和短片段(unique short,US)組成,兩端為末端反向重復序列TRL(longtermi

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本文編號：692539