本文關(guān)鍵詞：一種1型單純皰疹病毒載體系統(tǒng)的建立

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【摘要】：1型單純皰疹病毒(HSV-1)作為溶瘤病毒和病毒載體的研究已有很長的歷史.本研究利用細(xì)菌人工染色體技術(shù)建立了一種HSV-1載體系統(tǒng).首先,將HSV-1內(nèi)部反向重復(fù)序列(internal inverted repeat sequences,IR)兩側(cè)的片段克隆入p KO5獲得穿梭質(zhì)粒p KO5/BN,其電轉(zhuǎn)含p HSVBAC的大腸桿菌后篩選獲得刪除IR區(qū)重組DNA的p HSVΔIR-BAC.p HSVΔIR-BAC轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞獲得刪除IR區(qū)的重組病毒HSVΔIR(MH1001).上述p KO5/BN和含p HSVΔIR-BAC的大腸桿菌構(gòu)成了HSV-1載體系統(tǒng).利用該系統(tǒng)獲得了表達(dá)綠色熒光蛋白EGFP的重組病毒HSVΔIR/EGFP(MH1002).MH1001和MH1002在感染的Vero細(xì)胞中增殖水平略低于野生型HSV-1,但無顯著差異;Western印跡檢測表明,重組病毒早期蛋白質(zhì)ICP0、ICP4、ICP8、ICP22、ICP27在感染細(xì)胞中的表達(dá)水平下降;免疫熒光及激光共聚焦檢測表明,重組病毒與野生型病毒均存在于細(xì)胞質(zhì)中.以上結(jié)果表明,刪除IR區(qū)的重組HSV-1保留了復(fù)制能力,能夠攜載并表達(dá)外源基因,建立的HSV-1載體系統(tǒng)可用于構(gòu)建攜載外源基因的復(fù)制型重組HSV-1.
【作者單位】： 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 型單純皰疹病毒 病毒載體 細(xì)菌人工染色體 內(nèi)部反向重復(fù)序列
【基金】：新疆維吾爾自治區(qū)高技術(shù)研究發(fā)展項目(No.2010016)~~
【分類號】：R373.11
【正文快照】： 1型單純皰疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)為嗜神經(jīng)性病毒,在人群中感染非常普遍,臨床表現(xiàn)為黏膜或皮膚局部集聚皰疹等輕微癥狀.HSV-1為雙鏈DNA病毒,基因組152 kb,由獨特長片段(unique long,UL)和短片段(unique short,US)組成,兩端為末端反向重復(fù)序列TRL(longtermi

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：692539