發(fā)布時(shí)間：2017-08-18 02:14

  本文關(guān)鍵詞：SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）體外培養(yǎng)方法改良

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【摘要】：目的：通過不同的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)分離提取方法、首次換液時(shí)間改良SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的體外培養(yǎng)方法,探討更為有效合理的SD大鼠BMSCs體外培養(yǎng)方法,為更進(jìn)一步的相關(guān)基礎(chǔ)及臨床實(shí)驗(yàn)研究提供足量的干細(xì)胞源細(xì)胞。 方法：通過全骨髓貼壁法、改良全骨髓貼壁法、密度梯度離心法3種不同的方法提取SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),然后通過與接種后8h、24h2種不同的首次換液時(shí)間組合,觀察和對(duì)比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在每種組合中的形態(tài)學(xué)表現(xiàn),體外培養(yǎng)時(shí)增殖、傳代的效率,傳代后BMSCs的細(xì)胞活力情況,傳代后BMSCs的細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況,從而進(jìn)行篩選體外增殖培養(yǎng)SD大鼠BMSCs更為合理的體外擴(kuò)增模式。 結(jié)果：全骨髓貼壁法、改良全骨髓貼壁法8h首次換液時(shí)即可見少量梭形、三角或多角形細(xì)胞貼壁,而密度梯度離心法提取的細(xì)胞中僅部分培養(yǎng)瓶中可見極少量貼壁細(xì)胞,隨著首次換液時(shí)間的推后貼壁細(xì)胞逐漸增多,至首次換液時(shí)間24h組時(shí)3種方法組均可見較多梭形、三角或多角形細(xì)胞貼壁；全骨髓貼壁法、改良全骨髓貼壁法首次傳代時(shí)間7-8天,密度梯度離心法首次傳代時(shí)間12-14天,前兩種細(xì)胞提取方式較后者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；3種提取方法獲取的細(xì)胞第三代至第八代每代細(xì)胞增殖時(shí)間約為7-8天,各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示全骨髓貼壁法組、改良全骨髓貼壁法組和密度梯度離心法組先后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和停滯期時(shí)間基本相同,密度梯度離心法提取組細(xì)胞傳至第九代時(shí),細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,細(xì)胞增殖能力較前明顯減弱甚至停滯,而全骨髓貼壁法組和改良全骨髓貼壁法組未見明顯變化。取各組增殖良好的第三代大鼠BMSCs分別行臺(tái)盼藍(lán)染色和CD34、CD44細(xì)胞表面抗原檢測(cè),活細(xì)胞比例檢測(cè)結(jié)果示3種細(xì)胞提取方法均可獲得活力較好的BMSCs,各組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；BMSCs細(xì)胞表面抗原表達(dá)檢測(cè)結(jié)果示密度梯度離心法組和改良全骨髓貼壁法8h首次換液組表現(xiàn)良好,與其它3組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：全骨髓貼壁法、改良全骨髓貼壁法、密度梯度離心法3種SD大鼠骨。髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的提取方法均可在體外擴(kuò)增培養(yǎng)過程中較好的展現(xiàn)出BMSCs特有的細(xì)胞形態(tài),并且能在一定程度上穩(wěn)定傳代。全骨髓貼壁法和改良全骨髓貼壁法較密度梯度離心法貼壁效率高、首次傳代時(shí)間短、持續(xù)增殖能力及細(xì)胞活力強(qiáng)；改良全骨髓貼壁法和密度梯度離心法較全骨髓貼壁法得到大鼠BMSCs的純度較高。在改良全骨髓貼壁法提取大鼠BMSCs后采用全量換液方式并適當(dāng)?shù)奶崆笆状螕Q液時(shí)間可在不影響大鼠BMSCs體外增殖培養(yǎng)的效率、細(xì)胞活性的前提下提高所獲得大鼠BMSCs的純度,是一種較為適合的大鼠BMSCs的體外培養(yǎng)模式。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 體外培養(yǎng) 提取方式 換液時(shí)間
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-12
• 英文縮寫詞索引12-13
• 1 引言13-16
• 2 材料和方法16-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材16-17
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑17-18
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 2.1.5 試劑配制18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 2.2.1 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的提取方法19-20
• 2.2.2 不同首次換液時(shí)間和日常換液及傳代過程的處理20-21
• 2.2.3 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)形態(tài)學(xué)的觀察和對(duì)比21
• 2.2.4 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)細(xì)胞活力的觀察和對(duì)比21
• 2.2.5 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)生長(zhǎng)曲線的觀察和對(duì)比21-22
• 2.2.6 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)志的結(jié)果和對(duì)比22
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和圖像處理22-23
• 3 結(jié)果23-27
• 3.1 不同提取方法SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)形態(tài)學(xué)的觀察對(duì)比23-24
• 3.1.1 全骨髓貼壁法23
• 3.1.2 改良細(xì)胞貼壁法23-24
• 3.1.3 密度梯度離心法24
• 3.2 不同提取方法SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的首次傳代時(shí)間對(duì)比24-25
• 3.3 不同提取方法SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)細(xì)胞活力的觀察對(duì)比25
• 3.4 不同提取方法SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)生長(zhǎng)曲線觀察和對(duì)比25
• 3.5 不同提取方法SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)志測(cè)試結(jié)果對(duì)比25-27
• 4 討論27-30
• 4.1 大鼠BMSCs細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇27-28
• 4.2 大鼠BMSCs細(xì)胞提取方法選擇28-29
• 4.3 大鼠BMSCs首次換液時(shí)間的選擇和首次換液方式的選擇29-30
• 5 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)(正文)31-33
• 附圖33-46
• 6 文獻(xiàn)綜述46-73
• 6.1 干細(xì)胞特性46-52
• 6.1.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞46-50
• 6.1.2 神經(jīng)干細(xì)胞50-52
• 6.2 干細(xì)胞制備52-53
• 6.3 基礎(chǔ)研究53-55
• 6.4 臨床研究55-62
• 6.5 臨床應(yīng)用62-64
• 6.5.1 神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cells)的臨床應(yīng)用62-63
• 6.5.2 表皮干細(xì)胞(epidermal stem cells)和毛囊干細(xì)胞(hair follicle stem cells)的臨床應(yīng)用63-64
• 6.5.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)64
• 6.6 研究面臨的主要問題64-65
• 參考文獻(xiàn)(文獻(xiàn)綜述部分)65-73
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷73-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號(hào)：692202