本文關鍵詞：RNA干擾抑制Beclin1基因對裸鼴鼠成纖維細胞增殖與凋亡的影響

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【摘要】：目的應用RNA干擾技術抑制自噬調控基因Beclin 1的表達,檢測Beclin 1表達對裸鼴鼠皮膚成纖維細胞增殖與凋亡的影響以及p53、BAX、Bcl2等基因表達的影響。方法分別檢測裸鼴鼠成纖維細胞經饑餓、H_2O_2刺激等處理后Beclin 1的表達,然后采用設計的Beclin l基因的干擾RNA及陰性對照分別瞬時轉染裸鼴鼠成纖維細胞。采用real-time PCR及Western blot法檢測沉默效果后,采用CCK-1實驗檢測沉默后細胞增殖活性,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況,然后采用Western blot檢測相關基因蛋白表達水平。結果饑餓與H_2O_2刺激均能導致Beclin 1表達水平的改變。采用gene expresso轉染試劑對裸鼴鼠皮膚成纖維細胞轉染效率可達到90%以上,real-time PCR及Western blot結果顯示所設計的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表達。Beclin 1基因沉默后,裸鼴鼠皮膚成纖維細胞增殖抑制率均顯著高于對照組,細胞早期凋亡與晚期凋亡率均顯著升高,同時p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、m TOR等表達量下降。結論 Beclin 1在裸鼴鼠成纖維細胞抵抗饑餓、H_2O_2刺激等過程中表達量顯著變化,同時抑制Beclin 1的表達,可抑制裸鼴鼠細胞增殖,促進其凋亡,這提示Beclin 1基因對裸鼴鼠自噬、增殖、凋亡起到調控作用。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學實驗動物中心;
【關鍵詞】： 裸鼴鼠 成纖維細胞 Beclin RNA干擾 增殖 凋亡
【基金】：國家科技支撐計劃(No.2015BAI09B02) 國家自然科學基金(No.31402028) 上海市衛(wèi)計委課題(No.20144Y0205)聯(lián)合資助
【分類號】：R-33
【正文快照】： ,(Laboratory Animal Center of the Second Military Medical University,Shanghai 200433,China)bition of Beclin 1 gene expression can inhibit cell proliferation and induce apoptosis.Therefore,Beclin1 gene may play aregulatory role in autophagy,proliferation

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