發(fā)布時(shí)間：2017-08-15 12:02

  本文關(guān)鍵詞：RNA干擾抑制Beclin1基因?qū)β泯B鼠成纖維細(xì)胞增殖與凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 裸鼴鼠 成纖維細(xì)胞 Beclin RNA干擾 增殖 凋亡

【摘要】：目的應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制自噬調(diào)控基因Beclin 1的表達(dá),檢測(cè)Beclin 1表達(dá)對(duì)裸鼴鼠皮膚成纖維細(xì)胞增殖與凋亡的影響以及p53、BAX、Bcl2等基因表達(dá)的影響。方法分別檢測(cè)裸鼴鼠成纖維細(xì)胞經(jīng)饑餓、H_2O_2刺激等處理后Beclin 1的表達(dá),然后采用設(shè)計(jì)的Beclin l基因的干擾RNA及陰性對(duì)照分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染裸鼴鼠成纖維細(xì)胞。采用real-time PCR及Western blot法檢測(cè)沉默效果后,采用CCK-1實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默后細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,然后采用Western blot檢測(cè)相關(guān)基因蛋白表達(dá)水平。結(jié)果饑餓與H_2O_2刺激均能導(dǎo)致Beclin 1表達(dá)水平的改變。采用gene expresso轉(zhuǎn)染試劑對(duì)裸鼴鼠皮膚成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到90%以上,real-time PCR及Western blot結(jié)果顯示所設(shè)計(jì)的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表達(dá)。Beclin 1基因沉默后,裸鼴鼠皮膚成纖維細(xì)胞增殖抑制率均顯著高于對(duì)照組,細(xì)胞早期凋亡與晚期凋亡率均顯著升高,同時(shí)p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、m TOR等表達(dá)量下降。結(jié)論 Beclin 1在裸鼴鼠成纖維細(xì)胞抵抗饑餓、H_2O_2刺激等過(guò)程中表達(dá)量顯著變化,同時(shí)抑制Beclin 1的表達(dá),可抑制裸鼴鼠細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡,這提示Beclin 1基因?qū)β泯B鼠自噬、增殖、凋亡起到調(diào)控作用。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【關(guān)鍵詞】： 裸鼴鼠 成纖維細(xì)胞 Beclin RNA干擾 增殖 凋亡
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃(No.2015BAI09B02) 國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31402028) 上海市衛(wèi)計(jì)委課題(No.20144Y0205)聯(lián)合資助
【分類(lèi)號(hào)】：R-33
【正文快照】： ,(Laboratory Animal Center of the Second Military Medical University,Shanghai 200433,China)bition of Beclin 1 gene expression can inhibit cell proliferation and induce apoptosis.Therefore,Beclin1 gene may play aregulatory role in autophagy,proliferation

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：678030