本文關(guān)鍵詞：IMP-38重組蛋白純化、遺傳環(huán)境及產(chǎn)IMP-38菌株毒力基因研究

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【摘要】：目的(1)獲得并純化金屬酶新亞型IMP-38重組蛋白。(2)探討IMP-38基因的遺傳環(huán)境。(3)了解產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌菌株毒力基因分布。方法(1)構(gòu)建PUC19/IMP-38重組質(zhì)粒驗證IMP-38基因序列。(2)構(gòu)建原核表達載體pet-28a+/IMP-38,對目的基因誘導(dǎo)表達、純化及復(fù)性。(3)提取9株產(chǎn)IMP-38菌株基因組DNA,采用普通PCR、長片段PCR和重疊延伸PCR探討IMP-38基因與整合子、轉(zhuǎn)座子關(guān)系。(4)提取9株產(chǎn)IMP-38菌株基因組DNA,PCR檢測7種莢膜血清型基因和25種毒力基因。結(jié)果(1)成功構(gòu)建PUC19/IMP-38重組質(zhì)粒,證明前期測序結(jié)果完全正確,確定本研究IMP基因為IMP新亞型-IMP-38。(2)成功構(gòu)建原核表達載體pet-28a+/IMP-38,目的基因大量表達且獲得純度較高的重組蛋白。(3)IMP-38基因位于Ⅰ類整合子上,后者位于轉(zhuǎn)座子Tn402-like上。產(chǎn)IMP-38菌株上攜帶mer1696操縱子、Tn5051轉(zhuǎn)座子,且存在tnp513、IS26、tnpU和IS5075等遺傳標(biāo)記。(4)9株產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)了4株產(chǎn)9種毒力基因菌株,分別為fimH1、mrkD、ycfm、kpn、entB、irp-2、uge、wabG和are A,未發(fā)現(xiàn)其他毒力基因和上述莢膜血清型基因。結(jié)論(1)本研究IMP基因為IMP新亞型-IMP-38。(2)成功構(gòu)建原核表達載體pet-28a+/IMP-38,獲得純化的重組蛋白。(3)IMP-38基因位于Ⅰ類整合子上,后者位于Tn402-like轉(zhuǎn)座子上,產(chǎn)IMP-38菌株還存在其他類型轉(zhuǎn)座子和插入序列。(4)同一克隆型細菌攜帶的毒力基因并不相同,檢測毒力基因十分必要。圖18幅,表3個,參考文獻81篇。
【關(guān)鍵詞】：IMP-38基因 重組蛋白 遺傳環(huán)境 毒力基因
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 縮略詞表9-10
• 1 緒論10-12
• 2 新型碳青霉烯酶IMP-38重組蛋白原核表達及純化12-33
• 2.1 材料12-14
• 2.1.1 細菌菌種與質(zhì)粒載體12
• 2.1.2 主要試劑12-14
• 2.1.3 主要儀器14
• 2.2 方法14-24
• 2.2.1 構(gòu)建IMP-38/PUC19重組質(zhì)粒驗證IMP-38基因序列14-19
• 2.2.2 原核表達載體的構(gòu)建及鑒定19-21
• 2.2.3 目的基因表達、純化及復(fù)性21-24
• 2.3 結(jié)果24-31
• 2.3.1 構(gòu)建IMP-38/PUC19重組質(zhì)粒驗證IMP-38基因序列24-25
• 2.3.2 原核表達載體的成功構(gòu)建25-26
• 2.3.3 目的基因表達、純化及復(fù)性26-31
• 2.4 討論31-33
• 2.4.1 構(gòu)建IMP-38/PUC19重組質(zhì)粒驗證IMP-38基因序列31
• 2.4.2 原核表達載體的構(gòu)建及鑒定31
• 2.4.3 目的基因表達、純化及復(fù)性31-33
• 3 IMP-38基因遺傳環(huán)境研究33-44
• 3.1 材料33
• 3.1.1 細菌菌種33
• 3.1.2 主要試劑33
• 3.1.3 主要儀器33
• 3.2 方法33-38
• 3.2.1 IMP-38基因與整合子關(guān)系探討33-35
• 3.2.2 IMP-38基因與轉(zhuǎn)座子關(guān)系探討35-38
• 3.3 結(jié)果38-42
• 3.3.1 IMP-38基因與整合子關(guān)系38-39
• 3.3.2 IMP-38基因與轉(zhuǎn)座子關(guān)系探討39-42
• 3.4 討論42-44
• 3.4.1 IMP-38基因與整合子關(guān)系探討42
• 3.4.2 IMP-38基因與轉(zhuǎn)座子關(guān)系探討42-44
• 4 產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌毒力因子研究44-50
• 4.1 材料44
• 4.1.1 細菌菌種44
• 4.1.2 主要試劑44
• 4.1.3 主要儀器44
• 4.2 方法44-47
• 4.2.1 莢膜血清型基因檢測44-46
• 4.2.2 毒力基因檢測46-47
• 4.3 結(jié)果47-48
• 4.3.1 莢膜血清型檢測結(jié)果47
• 4.3.2 毒力基因檢測結(jié)果47-48
• 4.4 討論48-50
• 4.4.1 莢膜血清型基因檢測48
• 4.4.2 毒力基因檢測48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-57
• 綜述57-73
• 參考文獻69-73
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果73-74
• 致謝74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 解庭波;;大腸桿菌表達系統(tǒng)的研究進展[J];長江大學(xué)學(xué)報(自科版)醫(yī)學(xué)卷;2008年03期

2 汪雅萍;楊俊;應(yīng)春妹;杜坤;張灝e，

本文編號：677824