本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌多藥外排蛋白QacA的功能分析

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【摘要】：目的：評價金黃色葡萄球菌多藥耐藥主動外排蛋白QacAα-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸對于底物轉(zhuǎn)運(yùn)的重要性。 方法：1.采用半胱氨酸定點(diǎn)誘變的方法誘變QacA蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸I2(異亮氨基酸)，S3(絲氨酸)，F(xiàn)4(苯丙氨酸)，F(xiàn)5(苯丙氨酸)，T6(蘇氨酸)，K7(賴氨酸)，D10(天冬氨酸)，M11(蛋氨酸)，R17(精氨酸)，W18(色氨酸)，T19(蘇氨酸)，A20(丙氨酸)， V21(纈氨酸)，V22(纈氨酸)，V23(纈氨酸)，，F(xiàn)29(苯丙氨酸)， D34(天冬氨酸)，P43(脯氨酸)，E48(谷氨酸)，E50(谷氨酸)，P51(脯氨酸)，將誘變質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，提取的誘變株質(zhì)粒通過BamHI酶和EcoRI酶篩選和基因測序驗證。2.通過瓊脂平板稀釋法測定誘變株最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)，并采用熒光運(yùn)輸試驗檢測誘變株運(yùn)輸活性。3.Western Blot驗證各誘變株均表達(dá)QacA蛋白，并比較其表達(dá)量。 結(jié)果：1.成功半胱氨酸定點(diǎn)誘變22個氨基酸，獲得22株誘變菌株。2.MIC和MBC結(jié)果分析提示獲得的誘變菌株S3C，T6C，R17C，T19C，A20C，F(xiàn)29C，E50C對所測藥物完全恢復(fù)敏感性，F(xiàn)4C,F5C,P51C對所測藥物耐藥性明顯降低，I2C，K7C，D10C，M11C，W18C，V21C，V22C，V23C，D34C，P43C，E48C和Q55C與QacA WT（pBluescriptII SK(+)/qacA）菌株結(jié)果近似。運(yùn)輸試驗結(jié)果與MIC、MBC結(jié)果一致，提示S3C，F(xiàn)4C，F(xiàn)5C，T6C，R17C，T19C，A20C，F(xiàn)29C，E50C，P51C誘變菌株失去對底物的轉(zhuǎn)運(yùn)能力。3.Western Blot提示S3C，F(xiàn)4C，F(xiàn)5C，T6C，R17C，T19C，A20C，F(xiàn)29C，E50C，P51C誘變菌株的QacA蛋白表達(dá)量與QacAWT菌株比較無明顯差異。 結(jié)論：QacA蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸S3，F(xiàn)4，F(xiàn)5，T6，R17，T19，A20，F(xiàn)29，E50，P51可能與QacA蛋白一價和二價陽離子底物的結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)功能密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 多藥外排蛋白QacA TMS α-螺旋 半胱氨酸定點(diǎn)誘變
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378.11
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 1 材料13-18
• 2 方法18-27
• 3 結(jié)果27-32
• 4 討論32-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 文獻(xiàn)綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文50-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間參加的學(xué)習(xí)和會議51-52

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 丁麗麗;于湘友;姚華;;金黃色葡萄球菌對抗菌藥物與消毒劑的交叉耐藥研究進(jìn)展[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2013年20期

本文編號：676274